苯酚 - 氯仿 - 异戊醇混合物的应用

概述^[1]

苯酚 - 氯仿 - 异戊醇混合物又叫酚-氯仿-异戊醇混合物，是指由上述三种试剂组成的混合物。

应用^[1]

高效提取土壤微生物DNA的方法，包括如下步骤：

(1)称取0.3-0.4g样品加入Lysing Matrix E Tube中。加入978μl的SPB，加入122μ l的MT Buffer；

(2)盖紧Lysing Matrix E Tube的盖子，将离心管置于涡旋混合仪上，对管内物质进行震荡破碎均质化，时间设定为40-50s。在8000r/min转速下离心15min。

(3)将上清液用大枪头吸出转入2ml的微离心管中，加入等体积的酚-氯仿-异戊醇 (25:24:1)，颠倒混匀，15℃，10000rpm，离心10min；

(4)转移上清至干净的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇(24:1)，颠倒混匀，15 ℃，10000rpm，离心10min，取上清；

(5)加入250μl的PPS，颠倒混匀10次以上，室温静置10min；

(6)在8000r/min转离心5min，用大口枪头将上清液转移至2ml离心管；

(7)吸取800μl的摇匀Binding Matrix加入上一步中的离心管；

(8)将离心管上下颠倒2min后静置3min，等待二氧化硅基质沉淀；

(9)移除500μl上清液，避免吸出沉淀物；

(10)将剩余的上清液与沉淀物重新混匀，吸取约600μl混合液移入SPIN Filter 中，8000r/min转下离心1min；

(11)倒掉收集管中的液体，重复上一步操作直至2ml离心管中的液体吸尽；

(12)加入已制备好的SEWS-M溶液500μl，用小枪头小心混匀后，8000r/min转下离 心1min，弃去收集管中的液体；

(13)重复上一步后，将收集管更换为1.5ml的Catch Tube；

(14)在室温下，将SPIN Filter风干5-10min；

(15)往SPIN Filter中加入80μl的DES溶液，用小枪头使之与Binding Matrix混 匀，65℃水浴15min。8000r/min转下离心2min，可得到约50μl的DNA溶液，再加入80μl的DES 溶液重复这一步操作，即可获得约100μl的土壤微生物DNA溶液。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201711361715.X 一种高效提取土壤微生物DNA的方法