苯酚-氯仿-异戊醇混合物的制备方法

背景及概述^[1]

苯酚-氯仿-异戊醇混合物常用作分析提取液用于提取DNA、多糖等。

制备^[1-4]

苯酚-氯仿-异戊醇混合物应用举例如下：

1）用于一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组DNA的提取，向产糖被细菌的培养物中加入提取缓冲液和溶菌酶，37℃下静置10min，再加入蛋白酶K，65℃下静置1h；加入苯酚-氯仿-异戊醇的混合溶液，抽提；加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提；加入冷乙醇和醋酸钠，离心，沉淀经乙醇洗涤后室温干燥，加DNA提取缓冲液溶解；加入RNA酶，37℃下静置10min；加入PEG6000，混匀，50℃下静置10min；加入苯酚-氯仿-异戊醇的混合溶液，抽提；加入氯仿-异戊醇混合溶液，抽提；加入冷乙醇和醋酸钠溶液，离心，沉淀经乙醇洗涤后室温干燥，加ddH2O或者TE缓冲液溶解，即为提取到的DNA溶液。

2）一种从沙冬青提取高质量基因组DNA的方法，包括如下步骤：(1)植物材料液氮速冻研磨成粉；(2)加DNA提取液并加蛋白酶K至20μg/mL，65℃保温；(3)离心收集上清液，加等体积的苯酚：氯仿：异戊醇混合液抽提，再离心收集上清液；(4)加0.6~0.8倍体积异丙醇沉淀DNA；乙醇洗涤，部分干燥后溶于TE缓冲液，得DNA粗提液；(5)向DNA粗提液中加入NaCl至0.5mol/L，再加入CTAB/NaCl溶液，并加入RNase-A至终浓度10μg/mL，65℃保温；(6)依次用等体积苯酚：氯仿：异戊醇混合液和等体积氯仿：异戊醇混合液抽提，收集上清液；(7)加0.6~0.8倍体积异丙醇沉淀DNA，再用乙醇洗涤，部分干燥后溶于TE缓冲液，得到高质量的DNA提取液。本发明可以从沙冬青提取高质量的基因组DNA。

3）一种从环境样品中提取纯化总细菌的方法，它包括如下操作步骤：取环境样品，加入水或缓冲液，混匀；加入苯酚-氯仿-异戊醇混合液，混匀，待溶剂分层，移取上层备用；将移取的上层进行离心，弃上清，保留沉淀；将沉淀洗涤至基本无色，重悬菌液即可。本发明方法简化了PCR检测的前处理步骤，省去了繁琐的DNA提取步骤，消除了PCR反应的干扰物质，直接用本方法处理得到的稀释菌液或菌落为模板进行PCR扩增，灵敏高，特异性好，检测时间短，大大降低了检测成本。

4）一种马齿苋多糖的提取方法。所述方法包括以下步骤：(1)马齿苋原药材粉碎后，采用乙醇或石油醚进行回流提取两次，每次2h，抽滤，烘干得到马齿苋药材粉末备用。(2)马齿苋药材粉末置于高压灭菌锅中进行提取，设定温度范围105-121℃，提取时间1h。(3)提取出的粗多糖溶液，采用等体积的苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)进行萃取去除蛋白质，留取上清水相溶液，将溶液进行旋蒸，采用无水乙醇沉淀过夜，离心分离获得多糖。采用本发明方法提取的多糖产量比传统水浴法提取的多糖量高出89％-96％，同时本发明方法所采用的设备简单易获取，纯化多糖的方法简单重复性好，整个过程提取成本低廉，适合大规模工业生产使用。

主要参考资料

[1]CN201210145537.8一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组DNA的提取方法

[2]CN201510875261.2一种从沙冬青提取基因组DNA的方法

[3]CN201611152634.4一种从环境样品中提取纯化总细菌的方法

[4]CN201810700186.X一种马齿苋多糖的提取方法