人胚胎绒毛膜细胞提取物的应用

背景^[1-6]

人胚胎滋养层细胞提取物是从人胚胎滋养层细胞提取的，人胚胎滋养层细胞从正常人胚胎滋养层组织制备。人胚胎滋养层细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。滋养层细胞是在胚胎发育成桑椹胚后，桑椹胚进一步发育，开始出现分化沿透明带内壁扩展和排列的一种个体较小的细胞。做基因诊断时，通常取少量滋养层细胞诊断是否患有遗传病，这样不会影响胎儿发育。

在胚胎发育成桑椹胚后，桑椹胚进一步发育，细胞开始出现分化。聚集在胚胎的一端，个体较大的细胞，称为内细胞团（inner cell mass，ICM），内细胞团的细胞是胚胎干细胞是一种未分化的细胞，具有发育全能性，将来发育成胎儿的各种组织，而沿透明带内壁扩展和排列的，个体较小的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘。所以做基因诊断时，通常取少量滋养层细胞诊断是否患有遗传病，这样不会影响胎儿发育。

人胚胎滋养层细胞主要功能：（1）胚胎滋养层是母亲子宫内膜和发育中胚胎之间的营养通路。（2）紧贴在子宫壁的滋养层是胚胎着床必不可少的步骤，随后形成胎盘。（3）覆盖着胎盘绒毛的人绒毛膜滋养层细胞提供母亲循环中氧和营养物质交换的介面。（4）它们合成和释放绒毛膜促性腺激素，胎盘催乳激素和血管生成素，表达CXCR4，CCR5和泌乳刺激素基因家族。

应用^[7-9]

人胚胎绒毛膜细胞提取物可用于人胚胎绒毛滋养层细胞在子宫脉管系统逆血流迁移的血流动力学研究：

在人胎盘发育过程中,滋养层细胞对子宫内膜血管的入侵至关重要,它是子宫的脉管系统进行重构的必须条件,而子宫脉管系统的重构对于确保胎儿胎盘系统得到充足的血液供应具有非常重要的意义。滋养层细胞的整个入侵过程是先进入毛细血管、再迁移至子宫螺旋动脉并在此过程中对子宫动脉血管系统进行重构。这一迁移过程提示,滋养层细胞的迁移方向是与血液的流动方向相反的,即滋养层细胞是逆血流而上的。

采用胰酶+DNA酶辅助消化的方法可显著提高原代培养滋养层细胞的产量;同时,通过Percoll非连续梯度离心以及相应的差速贴壁和机械刮除等纯化步骤后得到的滋养层细胞纯度相对较高,可达95%以上,且细胞形态单一,生长稳定,细胞活力强。这说明本文采用的方法适合滋养层细胞的分离、纯化和体外培养。其次,本文研究了流动剪切应力对滋养层细胞迁移行为的影响。

结果表明:在无流动条件下,滋养层细胞表现出持续无方向性的位置变化,但并未发现在单一方向上的显著性迁移现象。在7.5、15和30dyne/cm2的剪切应力作用下,滋养层细胞的平均运动速度和X轴(剪切应力方向)上的绝对位移都随剪切应力水平的增加而呈显著的线性增加趋势。同时,滋养层细胞在X轴垂直方向上的位移却并未为零,特别是在6-12h这段时间内细胞运动趋于稳定,表现出了一定的自主性迁移行为。

在剪切应力作用下,细胞膜流动性的改变和敏感离子信号通道的阻断可显著的下调滋养层细胞的迁移速度和在X轴垂直方向上的净位移。这些结果表明剪切应力调控了人体滋养层细胞的迁移行为。但与体内的情况相反的是,剪切应力作用下滋养层细胞的迁移方向并不是逆流而上却是顺流而下的。

参考文献

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