大鼠脉络膜组织提取物的应用

背景^[1-6]

大鼠脉络膜血管细胞提取物是从大鼠原代脉络膜血管细胞提取的，大鼠原代脉络膜血管细胞从正常大鼠脉络膜组织制备。大鼠脉络膜组织提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

脉络膜位于视网膜和巩膜之间，是一层柔软光滑、具有弹性和富有血管的棕色薄膜。它起于前部的锯齿缘，后止于视神经周围；内面借一层十分光滑的玻璃膜与视网膜的色素上皮层相联系，外面借一潜在性间隙与巩膜相接，有脉络膜周层的细微纤维小板伸展而混入巩膜棕黑板中，并有血管和神经由此穿过。脉络膜主要有血管所构成，其厚度常因血管的充盈状态而有很大的变异，根据一般测量，脉络膜的前部较薄，约0.1毫米，后部较厚，约0.22毫米，而在黄斑部特别厚。

脉络膜的主要作用是营养视网膜外层，相当于供给大脑营养的软-蛛网膜；其次能阻断透入巩膜进入眼内的光线，以保证成像清晰。胚胎学上脉络膜来源于中胚叶和神经外胚叶，脉络膜上腔、脉络膜血管层和弹力组织来自中胚叶；色素上皮层及视网膜内九层来自神经外胚叶。

脉络膜的组织结构由外向内分为五层：

1.脉络膜上腔层，由结缔组织细束和巩膜连接，含有弹力纤维、色素细胞和平滑肌纤维等。睫状后长、后短动脉及睫状神经均由此穿过。

2.大血管层，由动脉和互相吻合的静脉构成，各血管之间有色素细胞和少量平滑肌纤维。这层的动脉主要由睫状后动脉分支。

3.中血管层，与大血管层间无明显分界，仅血管逐渐变细。黄斑部无大血管层，仅有排列较紧密的中血管层。本层色素较少。

4.毛细血管层，为一层毛细血管，无色素。

5.玻璃膜，位于视网膜和脉络膜之间，由视乳头附近向周边部变薄。光镜观察可分为内外两层；内为表皮层，即色素上皮基底膜，外为弹力层。

应用^[7-9]

大鼠脉络膜组织提取物可用于大鼠脉络膜新生血管的作用及其机制探讨研究：

脉络膜新生血管是多种脉络膜疾病共同的病理基础,是引起年龄相关性黄斑变性、病理性近视等多种脉络膜疾病视力障碍的重要因素之一。在以往的研究中发现,Endostar作为一种新型的重组人内皮抑素,在体外对眼脉络膜-视网膜内皮细胞生长、粘附和移行有着明显的抑制作用。本研究旨在探明Endostar在动物模型上对脉络膜新生血管的作用并对其作用机制进行初步探讨。

方法：通过532激光光凝棕色挪威大鼠Bruch膜,诱导建立大鼠脉络膜新生血管的模型,对模型中实验组动物予以隔天玻璃体注射Endostar进行干预,对照组动物对应予以平衡盐溶液(PBS)作用。14天后,通过观察注射Endostar组和对照组的眼底荧光造影的图像,比较两组动物新生血管的渗漏发生率和强度的差异。同时,通过脉络膜铺片和免疫组化试验技术,比较两组试验动物脉络膜新生血管的体积的差异。最后,通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术对比两组动物样本中几种血管生成相关的细胞因子并利用western blot验证血管生成关键分子血管内皮生长因子(VEGF),探讨药物在动物模型中作用的分子机制。

结果：通过注射Endostar组和对照组的眼底荧光造影的图像,对两组中荧光素渗漏的数量和等级进行比较,发现给药组大鼠的眼底荧光素渗漏率(50.3%)和程度远远低于对照组(75.8%),差异具有统计学意义(P<0.001)。通过脉络膜铺片比较两组中的脉络膜新生血管(CNV)面积,给药组面积(51711±2880pixel)显著小于对照组CNV面积(67019±±5407pixel).通过对两组各自脉络膜新生血管的厚度进行测量比较,给药组的脉络膜新生血管厚度的平均值小于对照组。RT-PCR和western blot的结果显示,Endostar可以有效抑制模型鼠眼后段的VEGF的转录和翻译水平,同时,在转录水平明显下调HIF-1α和CXCL1。

参考文献

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