小鼠肾小管组织提取物的应用

背景^[1-6]

小鼠肾小管组织提取物是大鼠肾小管组织提取产物包含小鼠肾小管组织不同种类的细胞可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

肾近曲小管上皮细胞在肾脏功能中起了关键作用。它们重吸收肾小球滤液中几乎所有的葡萄糖和氨基酸，允许其它无营养价值的物质排放至尿液中。在先天性疾病、新陈代谢疾病以及炎症反应中，该细胞出现于损伤部位附近，可分泌如细胞因子和趋化因子等炎症介质，并可通过产生IL-8影响和直接参与白细胞趋化反应，进而参与急性炎症反应的过程。在炎症、肾移植术后及新月体肾小球肾炎中，该细胞可表达IL-2Rα型和第二类MHC分子，说明这些细胞可能参与免疫性肾损伤的发病过程。

肾近曲小管上皮细胞的培养为研究管状细胞与肾脏疾病之间的关联提供了一个有用的体外模型。肾小管是与肾小囊壁层相连的一条长为30～50mm的细长上皮性小管，具有重吸收和排泌功能，在排泄代谢产物、维持机体体液平衡及酸碱平衡方面起关键作用。小鼠肾小管与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管,具有重吸收（reabsorption）和排泌作用（secretion）.肾小管按不同的形态结构，分布位置和功能分成三部分;近端小管，细段和远端小管。肾小管在肾髓质中。

缺血、感染和毒物可引起肾小管上皮细胞变性坏死，导致肾功能障碍。某些药物和激素，如醛固酮、抗利尿激素、心房钠尿肽（心钠素）、甲状旁腺激素等也可导致肾小管功能改变。

应用^[7][8]

小鼠肾小管组织提取物可用于BAFF/BAFF-R信号对小鼠肾小管上皮细胞的作用及机制初探研究：

肾移植受者发生抗体介导排斥反应时移植肾组织肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)异常高表达B细胞活化因子(B cell activating factor belong to the tumor necrosis factor family,BAFF)及其受体(BAFF receptor,BAFF-R)。系列研究结果提示BAFF/BAFF-R信号增强可能经RTECs参与肾移植抗体介导的慢性排斥反应过程。为进一步了解BAFF/BAFF-R在RTECs的表达及其意义,开展了本项研究。

研究中以小鼠原代RTECs为研究对象,分析了BAFF信号对RTECs生长特性的影响及可能机制。部分目的:旨在建立获得纯度较高的小鼠原代RTECs分离、培养方法,为后续研究奠定基础。方法:选用4~10周龄的C57BL/6小鼠,取其肾皮质,以酶消化法结合筛网过滤法分离RTECs。选择含10%胎牛血清、1%双抗、1%胰岛素-转铁蛋白-硒-X和50nmol/L氢化可的松的DMEM/F12完全培养基用以细胞培养;细胞免疫荧光法检测上皮细胞特异性表达的细胞角蛋白18(cytokeratin-18,CK-18)及荧光素钠转运功能对RTECs进行鉴定。

结果:融合成单层的RTECs衔接紧密,呈现出多边形鹅卵石样的典型形态,折光性好;免疫荧光检测结果显示细胞呈现黄绿色荧光,且阳性率在90%以上;荧光素钠转运实验结果显示随着时间延长胞内荧光强度逐渐增强,提示该细胞具有RTECs的离子转运功能。建立了简单、快速、重复性强且纯度较高的小鼠原代RTECs培养方法。

以500U/m L干扰素(interferon,IFN)-γ刺激小鼠原代RTECs,48h后流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测RTECs细胞膜上BAFF及BAFF受体(BAFF-R)的表达;以重组BAFF蛋白和/或阻断性B细胞活化因子受体-Fc融合蛋白(BAFF-R-Fc)刺激RTECs,48h后以荧光素钠转运实验检测RTECs离子转运功能、细胞免疫荧光法检测CK-18的表达、四唑氮化合物(MTS)法检测RTECs增殖情况、FCM法检测细胞凋亡情况。

参考文献

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[8]宋丹.BAFF/BAFF-R信号对小鼠肾小管上皮细胞的作用及机制初探[D].苏州大学,2017.