人食管癌组织源成纤维细胞提取物的应用

背景^[1-4]

人食管癌组织源成纤维细胞提取物是从人食管癌组织源成纤维细胞提取的，人食管癌组织源成纤维细胞从人食管癌组织制备。人食管癌组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB和HIPAA批准的方案进行。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

食管癌代谢过程中，食管癌组织源成纤维细胞和破食管癌细胞相互协调，使食管癌质的形成与吸收处于一种动态平衡，维持食管癌骼的不断更新。其中，食管癌组织源成纤维细胞是食管癌形成细胞，对食管癌组织的生长发育、食管癌代谢平衡、食管癌量平衡和食管癌损伤修复起关键作用。

体外培养食管癌组织源成纤维细胞，作为常用的体外实验模型，成为研究食管癌生理、病理及修复的重要手段，也成为研究食管癌组织源成纤维细胞生长代谢及食管癌组织工程的基础。食管癌(carcinoma of esophagus)是主要起源于食管鳞状上皮和柱状上皮的恶性肿瘤，鳞癌约占90%，腺癌约占10%。

我国是食管癌的高发区，也是食管癌病死率最高的国家之一，年病死率超过100/10万人以上者有19个县市，年病死率最高者达303.37/10万人，食管癌最典型的临床表现为进行性吞咽困难。新观点及新概念：1.采用聚合酶链反应——酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)检测法对食管癌组织中端粒酶活性检测，其阳性表达率为83.7%，此方法可作为食管癌的早期诊断。2.鳞状细胞癌抗原(SCC)食道癌其阳性率为72.6%，可用于疗效的观察和预后的估计。

应用^[5][6]

可用于食管癌侵袭转移相关基因研究：

采用体外Matrigel侵袭克隆筛选建立高侵袭高转移食管癌亚细胞系EC9706-P4,应用全基因组芯片比较EC9706-P4与其亲本细胞系EC9706的基因表达谱,获得124个差异表达基因,其中48.3%(60/124)是与侵袭转移相关的基因。通过表达谱分析和生物信息学分析,表明TM4SF3可能是候选的食管癌侵袭转移相关的功能基因。Western blotting表明TM4SF3在57.1%的食管癌组织和高侵袭食管癌细胞系中显著上调表达。RNA干扰和外源性基因表达研究表明TM4SF3可显著促进食管癌细胞侵袭。在EC9706细胞过表达TM4SF3促进体内移植瘤基质侵袭、自发肺转移,并缩短小鼠生存期。进一步研究其分子机制表明TM4SF3显著上调ADAM12m,再上调ILK的表达。RNAi抑制ADAM12m表达能显著抑制TM4SF3介导的侵袭。

ADAM12m介导的FAK磷酸化依赖于Integrinβ3,并且通过促进Integrinβ3-FAK相互作用以促进FAK磷酸化。而且ADAM12m过表达与FAK磷酸化上调和ILK表达上调在临床组织标本具有高频度的相关性。因此,ADAM12m过表达及其相关信号通路的活化是食管癌进展中的高频事件,是促进食管癌侵袭和转移的重要功能性基因,因此也可能是治疗食管癌侵袭转移的有价值的靶标。功能性单抗库筛选功能性抗原基因的研究中,采用转移性食管癌原发瘤中分离的有核细胞免疫Balb/c小鼠,制备含有1260个杂交瘤克隆株的大容量食管癌功能性单抗库。

活细胞免疫荧光筛选获得了545株识别食管癌细胞膜蛋白的单抗。通过免疫组化筛选获得了485株与正常人食管组织不反应或者较弱反应的相对特异的单抗。通过迁移、侵袭、粘附、增殖等功能筛选获得了70株抑制迁移,7株抑制侵袭,5株抑制增殖,32株抑制与肺内皮粘附,48株与淋巴内皮粘附相关的单抗。选取其中20株进行抗原特征分析,并对其中8株单抗纯化抗体制备抗体亲和柱亲和纯化相应的功能性抗原蛋白。

采用MALDI-TOF和LCQ-TOF鉴定了其中3个抗体识别的功能性抗原及抗原相关序列,包括hDUS2(单抗12B8),1FAKI(单抗3D11),GRLF1(单抗4B9)。生物信息学分析这3个抗原基因具有粘附、运动和增殖等相关功能,表明功能性单抗库技术能有效筛选鉴定肿瘤相关抗原基因。通过这种方式筛选获得的功能性抗体及其靶抗原具有潜在的应用价值,表明功能性单抗库也是研究食管癌侵袭转移的有效策略。

参考文献

[1]TM4SF3 promotes esophageal carcinoma metastasis via upregulating ADAM12m expression[J].Zhuan Zhou,Yu-Liang Ran,Hai Hu,Jian Pan,Zhi-Feng Li,Li-Zhao Chen,Li-Chao Sun,Liang Peng,Xi-Lu Zhao,Long Yu,Li-Xin Sun,Zhi-Hua Yang.Clinical&Experimental Metastasis.2008(5)

[2]Matrix Metalloproteinase-9 Is Required for Tumor Vasculogenesis but Not for Angiogenesis:Role of Bone Marrow-Derived Myelomonocytic Cells[J].G-One Ahn,J.Martin Brown.Cancer Cell.2008(3)

[3]Abrogation of TGFβSignaling in Mammary Carcinomas Recruits Gr-1+CD11b+Myeloid Cells that Promote Metastasis[J].Li Yang,Jianhua Huang,Xiubao Ren,Agnieszka E.Gorska,Anna Chytil,Mary Aakre,David P.Carbone,Lynn M.Matrisian,Ann Richmond,P.Charles Lin,Harold L.Moses.Cancer Cell.2008(1)

[4]An activated Notch1 signaling pathway inhibits cell proliferation andinduces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma cell line EC9706[J].Zhaoming Lu,Hongtao Liu,Lexun Xue,Peirong Xu,Tianxiao Gong,Guiqin Hou.International Journal of Oncology.2008(3)

[5]Clonal diversity in carcinomas:its implications for tumour progression and the contribution made to it by epithelial-mesenchymal transitions[J].J.Guy Lyons,Erwin Lobo,Anna M.Martorana,Mary R.Myerscough.Clinical&Experimental Metastasis.2008(6)

[6]周转.食管癌侵袭转移相关基因研究[D].中国协和医科大学,2008.