ELISA检测的介绍和应用案例

ELISA检测（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原-抗体特异性反应的免疫学检测技术，通过酶催化底物显色实现对待测物质的定性或定量分析。其基本原理为：将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）表面，加入待测样本后，通过抗原-抗体结合形成复合物，再加入酶标记的特异性抗体或抗原，经洗涤后加入显色底物，颜色深浅与待测物浓度成正比，通过比色分析结果。检测的主要类型分为双抗体夹心法、间接法、竞争法。主要应用于医学诊断、科研领域、食品安全等领域。

用生物信息学从胎儿弯曲杆菌与空肠弯曲杆菌中锁定SapA与FlaA两个免疫显性抗原，再用pET-28a原核表达、镍柱纯化，以纯化蛋白包被酶标板建立间接ELISA检测方法^[1]。同样一套间接法，两种抗原的最优包被浓度却差了六倍以上。研究人员认为差异可能是在亲疏水性上，SapA偏疏水，易聚集或掩蔽表位，FlaA为亲水性蛋白，在固相载体上吸附更定向。同时提示，属内保守的FlaA适合初步筛查，特异性更强的SapA可精准识别胎儿弯曲杆菌，二者组合有望发展成多重ELISA检测。换言之，在这套ELISA检测方法里，抗原本身的理化性质就已经决定了包被量与灵敏性。

MVM是SPF级小鼠强制监测的病原，市售试剂盒多测血清抗体，无法检测是否带毒，因此将方向转向抗原检测^[2]。技术路线是典型的双抗体夹心ELISA检测：以原核表达的VP2蛋白免疫BALB/c小鼠，筛得1C5与8B9两株单抗，亲和力EC50分别为1.927与3.911 ng/mL。以1C5作捕获抗体（4 μg/mL）、HRP标记的8B9作检测抗体（1 μg/mL）配对，50 g/L BSA封闭2 h，待测抗原与检测抗体分别孵育1 h与1.5 h^[2]。最终最低检测限为病毒103.4 TCID50/mL、重组VP2蛋白50 ng/mL，与四种常见小鼠病毒无交叉反应，与qPCR的阳性、阴性及总符合率均为100%^[2]。

另有BVDV一篇走阻断法，检测目标是E2囊膜蛋白的中和抗体。阻断ELISA检测关心的是待检血清能否挡住酶标单抗与包被抗原的结合，因此读数指标不是D450而是阻断率^[3]。用杆状病毒-昆虫细胞（Sf9）系统表达去掉跨膜区的截短tE2蛋白（约45 kDa），以化学偶联法把单抗B6标记上HRP，方阵滴定后确定抗原1:1 000、HRP-B6 1:10 000为最佳工作浓度，血清按1:4稀释，5%鸡血清封闭，血清孵育2.0 h[3]。以166份血清样品作ROC曲线分析，取约登指数最大处的0.509为临界值，对应阻断率51%，敏感性为1:64，与商品化阻断ELISA试剂盒的符合率为94.35%，317份临床血清中检出阳性138份。研究提出，配合可区分野毒与疫苗免疫的NS3蛋白试剂盒，两种方法并用更利于BVDV净化。

ELISA检测的操作流程分一下主要几个步骤。包被：将抗原或抗体吸附于固相载体。加样：加入待测样本，孵育使抗原-抗体结合。加酶标抗体：加入酶标记的特异性抗体。显色：加入底物（如TMB），酶催化反应产生颜色。检测：用酶标仪测定吸光度，分析结果。其优点是灵敏度高（可达pg/mL级）、特异性强、可批量检测、操作相对简便。但是其缺点也不可忽视，操作繁琐、易受污染、需专业设备，且部分方法（如竞争法）定量复杂度较高。通过现代医学技术，ELISA检测可结合纳米材料、微流控技术或荧光标记（如荧光免疫吸附法FLISA），进一步提升灵敏度和检测速度。目前的生物医学领域，ELISA检测仍是最广泛应用的检测技术之一，尤其在资源有限场景中具有不可替代性。

参考文献

[1] 杨欢, 王策, 王玉飞, 等. 动物源弯曲杆菌免疫显性抗原鉴定及间接ELISA检测方法的建立[J]. 中国畜牧兽医, 2026, 53(3): 1418-1433.

[2] 陈莉, 张旭亮, 刘彪, 等. 小鼠细小病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 中国兽医科学, 2026, 56(3): 326-334.

[3] 程艳青, 涂少宇, 王省, 等. BVDV E2蛋白抗体阻断ELISA检测方法的建立[J]. 中国兽医杂志, 2026, 62(5): 36-44.