氧化槐果碱的药理研究

在传统中医药，苦参被广泛用于治疗类风湿性关节炎、皮肤瘙痒、动脉粥样硬化、脑缺血等症状，由于其极为复杂的化学成分，苦参的应用并不能受到国际学者的重视。经过多年对苦参化学成分的提取分离鉴定，结构明确的活性单体化合物被分离出来，如苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化槐果碱等，其中关于氧化槐果碱少有研究。据以往研究报道，氧化槐果碱有镇痛抗炎，抗肝损伤和神经保护作用，并通过调节GABA_A受体α1亚基在中枢神经系统中的表达发挥镇痛作用。

药理研究

1.氧化槐果碱的神经保护作用

癲痫是一种普遍的和主要的神经系统疾病，由大脑中的神经元的过度兴奋性和超同步放电引起，其特征是经常无端发作，以行为和脑电图的改变为主要观察指标，约三分之一癫痢发作患者对现有药物反应不佳。Liu等首先研究了氧化槐果碱在抗惊厥和神经保护方面的应用，小鼠预先灌胃氧化槐果碱(20、40、80mg/kg),30min后注射匹罗卡品，待观察到明显的癫痢发作症状后，进行脑电图(EEG)进行观察，结果显示模型组脑活动异常，如高幅度的尖峰，频繁的多峰形，棘波复合物等。然而，氧化槐果碱(40、80mg/kg)预处理的小鼠中，脑电图的异常程度显著减少，其中包括棘波的减少和幅度的降低:后取小鼠脑组织进行Nissl染色和Fluoro-jade B染色分别观察神经细胞生存和死亡数目，发现氧化槐果碱可降低损伤和死亡的锥体细胞数;并在蛋白水平对Bax、Bcl-2、Caspase-3对比模型组有反向调控作用。

通过在新生大鼠原代海马细胞培养建立糖氧剥夺细胞模型，免疫组化确定神经元细胞浓度达87%后进行实验。实验第一步进行MTT和乳酸脱氢酶(LDH)测试，发现氧化槐果碱给药后LDH外排降低，细胞存活数较模型组有显著提高;模型组细胞坏死过程中，部分神经细胞出现胞浆浓缩，细胞整体萎缩的现象，同时观察到凋亡小体的形成，给药组细胞形态有所改善;钙成像结果显示氧化槐果碱降低细胞内钙离子浓度，进而降低了线粒体膜电位，维持了细胞内部细胞器的稳定减少了凋亡的发生。另一篇类似的报导，采用相同的模型，同时检测MAPK信号通路在神经调控中的参与过程，发现氧化槐果碱对模型组 ERK1/2,JNK1/2和p38 MAPK的蛋白表达有逆转作用。

2.氧化槐果碱对肺损伤的保护作用

呼吸道合胞病毒(RSV)是世界范围内引起老年人、儿童和免疫抑制个体严重下呼吸道感染的主要原因。RSV感染介导的肺损伤对患者的发病率和死亡率有重大影响，因此治疗方案受到了极大限制。研究发现，氧化槐果碱可抑制RSV的复制和增加RSV感染的肺上皮A549细胞的生存能力。体外试验显示，氧化槐果碱抑制了A549细胞对炎性细胞因子和趋化因子的释放，如肿瘤坏死因子-α(TNF-a),白细胞介素-6(IL-6),IL-8;调节正常T细胞表达和分泌巨噬细胞炎性蛋白-1α和单核细胞趋化蛋白-1;降低RSV感染细胞活性氧的形成，增强抗氧化酶的活性，这与其激活核因子E2相关因子2相关。体内可显著减轻RSV触发的小鼠肺损伤的病理状况。总的来说，氧化槐果碱通过抑制氧化应激和炎症反应以减轻RSV增强的肺损伤。

3.氧化槐果碱对糖氧剥夺小胶质细胞的保护作用

小胶质细胞的过度激活和程序性凋亡会引起缺血性脑疾病，而氧化槐果碱用药所产生的抗炎和抗凋亡作用被证明可调控这一过程。在体外培养的BV-2小胶质细胞中,氧化槐果碱可减少糖氧剥夺再灌注引发的炎性反应，提高细胞活力并阻止乳酸脱氢酶的释放，下调环氧合酶2和诱导型一氧化氮合酶活性，降低TNF-a、IL-1、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1、前列腺素E2和一氧化氮的炎症因子水平;OSC还可抑制Toll样受体4(TLR4)及髓样分化蛋白88(MyD88)进而氧化槐果碱抑制凋亡，修复线粒体膜电位和降低Caspase-3活性,减少Bax增加Bcl-2的表达;同时通过磷酸化激活Akt和mTOR通路。综上，氧化槐果碱降低了小胶质细胞凋亡引起的炎症反应，可能被用于缺血性中风的治疗。

4.氧化槐果碱的镇痛作用

关于氧化槐果碱在中枢和外周的镇痛作用也有深入研究。耳肿胀测试中，氧化槐果碱(80mg/kg)可显着降低二甲苯模型组耳肿胀程度，效果强于阿司匹林(400mg/kg)阳性对照组;通过在脚底注射角叉胶建立慢性炎性动物模型，测试水肿脚组织足底机械缩足反应阈值，发现OSC可延长模型组缩足反应时间，升高疼痛耐受阈值;随后对动物模型后足水肿组织进行分子学机制研究，通过Western blot和免疫组化染色确定了OSC处理组总COX-2和p-ERK1/2蛋白含量的降低，而ERK1/2总蛋白含量不受影响，又用Elisa证实氧化槐果碱可逆转炎性组织TNF-a、IL-1p、IL-6、PGE2细胞炎性因子的释放。最终得到氧化槐果碱外周镇痛信号通路:ERK1/2-COX-2-PGE2。

通过短时间的热刺激所产生的疼痛(即阶段性疼痛)，是常用的测量躯体对于外界伤害中枢反应的常用方法。动物的温水甩尾反射主要由脊髓调控，温水甩尾实验用于测试甩尾反应的痛阙变化，高剂量氧化槐果碱(80mg/kg)增加了正常大鼠反应潜伏期25.46%，相比相同的测试环境下吗啡造成的效果无明显差异;热板法也是一种常见的感觉运动实验，阿片类镇痛药在脊髓髓质和中枢神经系统中起主要作用，高剂量氧化槐果碱是在热板试验同样有效，正常大鼠反应潜伏期提高了26.60%，与温水甩尾试验所获得的结果一致。此外，越来越多的证据表明，GABA作为神经系统抑制性受体，在初级传入突触前抑制(初级传入去极化)发挥重要作用，腹腔注射氧化槐果碱45min后取脑组织固定，进行免疫组化染色，结果发现，在大脑皮质和海马区域，GABA_A受体α1标记的神经元细胞数目有近两倍数目的增加,提示氧化槐果碱可能改变了细胞膜受体类型，增加GABA_A受体α1亚型从而抑制中枢神经系统的兴奋性[1]。

参考文献

[1] 郑凯音. 氧化槐果碱抗炎镇痛作用机制研究[D]. 西安:空军军医大学,2019.