氧化槐果碱的作用

背景及概述^[1][2]

氧化槐果碱是从豆根槐属植物苦参（Sophra　flavescens　Ait）或豆科植物苦豆子（Sophora　subprostrata chrnet　T.Chen）中分离出来的生物碱，是中草药的主要有效成分。为白色或类白色结晶性粉末，无臭、味苦。具有升高白细胞数，加强机体免疫力，而起抗痢疾杆菌、皮肤真菌、阿米巴原虫、滴虫等感染的作用，尚有利尿、平喘、催眠、抗心律失常等作用。内服可治疗急性菌痢、扁桃体炎、乳腺炎、盆腔炎、淋巴结炎、支气管炎、喘息、心律失常、白细胞低下等，对牛皮癣和失眠也可有效。

作用和用途^[2-3]

镇痛：氧化槐定碱（OSR）能够通过上调 GABAA受体的表达发挥起镇痛作用，OSC与氧化槐定碱化学结构相似，因此推测GABA受体也是OSC作用的靶蛋白。有研究利用GABA受体的激动剂和拮抗剂等相关工具药，进一步探讨OSC镇痛的作用机制。

实验结果发现侧脑室注射GABA（1.6 mg/kg）对小鼠正常行为不产生影响，也产生镇痛作用；当GABA（1.6 mg/kg）与阈下剂量的OSC（6 mg/kg）合用时，小鼠痛阈明显提高了，提示OSC的镇痛机制可能与GABA受体有关，从而使GABA对阈下剂量的 OSC产生协同作用。MUS是GABAA受体的特异性激动剂， 作用于GABA相似，MUS（0.1 μg/只）、阈下剂量的OSC （6 mg/kg）均不能产生中枢镇痛作用，MUS（0.1 μg/只）与OSC（6 mg/kg）合用时，小鼠表现安静，痛阈明显提高，表明OSC的镇痛作用可能有GABAA受体的参与，OSC 可能是通过激动GABAA受体，产生抑制性突触后电位，从而发挥了中枢抑制作用。

经典的GABAA受体拮抗剂PTX是疼痛研究中常用的工具药，实验证实侧脑室分别注射PTX （0.2 μg/只）时不产生镇痛作用，将PTX（0.2 μg/只）与镇痛剂量的OSC（80 mg/kg）合用时，小鼠痛域没有被提高，其机制是PTX抑制了GABAA受体的活性，从而拮抗了OSC 的镇痛作用，并进一步证实OSC能够作用与GABAA受体产生镇痛作用。综上所述，OSC具有明显的中枢镇痛作用，其镇痛机制可能与GABAA有关，然而中枢GABA能神经参与OSC镇痛 作用的详细机制有待进一步研究。

氧化槐果碱诱导SW480细胞凋亡。根据用药剂量分组，用MTT法测定氧化槐果碱对SW480细胞增殖的影响，荧光双染观察细胞形态变化，计数凋亡细胞比率；定时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测凋亡基因caspase-3和Bcl-2的变化。结果 显示OSC对体外培养的SW480细胞增殖具有明显抑制作用；OSC作用后凋亡细胞比例显著增加；凋亡基因caspase-3 mRNA表达上调而Bcl-2 mRNA表达下调。结论OSC可抑制体外培养的SW480细胞生长增殖，其作用机制与阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡有关。 

制备 ^[1，5-6]　

方法1：一种高纯度、高收率氧化槐果碱的制备方法，其具体步骤为：

1）氧化罐加水水浴温度升至75℃左右，计量加双氧水，缓缓加入槐果碱溶化；

2）将温度降至5862℃恒温反应；

3）氧化液反应至无双氧水后，用醚类物质或苯类物质中的一种萃取未反应的槐果碱，直至氧化液中基本无槐果碱为止；

4）真空减压浓缩反应液，加乙醇溶解，抽滤；

5）滤液经过脱色剂脱色，抽滤，回收；

6）加丙酮搅拌，冷却结晶，离心分离得氧化槐果碱粗品；

7）氧化槐果碱粗品重结晶得氧化槐果碱精品。

方法2：一种氧化槐果碱盐的制备方法，包括如下步骤：

1)将槐果碱加入所述槐果碱1-4倍质量的双氧水水溶液或过碳酸钠水溶液或过氧化脲水溶液中至少一种，调pH为2-5，在20℃-50℃，反应5-10h，所述双氧水水溶液体积百分浓度为10-30％，所述过碳酸钠水溶液的质量百分浓度为30-40％，所述过氧化脲水溶液的质量百分浓度为30-40％；

2)用C1-C2的卤代烷或苯或甲苯或二甲苯中的一种萃取未反应的槐果碱，直至萃取液经薄层色谱检查无槐果碱为止，调pH为8.0-8.5；

3)减压浓缩至原体积的1/15-1/20，加无水乙醇至溶解，过滤，减压浓缩至干，真空干燥至完全固化；

4)用体积比为1∶3-4的无水乙醇和丙酮的混合溶剂反复重结晶，得到白色氧化槐果碱。

5)将1摩尔氧化槐果碱用溶剂溶解，(所加溶剂量是使氧化槐果碱溶解为宜)再加1-1.5 摩尔有机酸或无机酸的溶液，15℃-30℃反应1-2h，过滤，滤液减压浓缩至干，真空干燥，即制成一种氧化槐果碱盐。

方法3：一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法，包括以下步骤：

1）预处理：称取香菇，按照料液比1g：30 mL加入水，40-50℃加热40-60min，冷却后，过滤，香菇回收利用，得到的香菇滤液备用；将狼牙刺花和得到的香菇滤液按照料液比1：8混合，在3-6℃下浸泡2h，每隔20min翻动搅拌一次，过滤，得到预处理过的狼牙刺花；

2）提取：将步骤（1）预处理过的狼牙刺花，按照料液比1g：8 mL加入至少含有一种有机溶剂的溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：8 mL用至少含有一种有机溶剂的溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液和滤渣，合并2次得到的滤液，将滤液经旋转 蒸发仪减压浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；将滤渣按照料液比1g：10 mL加入质量浓度为 1%-5%的乙酸溶液，浸泡72h，过滤后收集滤液和滤渣，滤渣按照料液比1g：10 mL用质量浓度为1%-5%的乙酸溶液继续浸泡48 h，过滤后收集滤液，滤液经过真空浓缩得到氧化槐果碱粗提物浸膏；合并2次得到的氧化槐果碱粗提物浸膏，备用；

3）水沉除杂：将步骤（2）最终得到的氧化槐果碱粗提物浸膏中加入3-5倍质量的水，用氨水调节pH至11，室温下静置48 h后过滤，收集滤液；

4）将步骤（3）得到的滤液经过真空浓缩得到浓缩膏、浓缩膏真空干燥后、采用甲醇和二氯甲烷为洗脱液进行硅胶柱分离、加入乙醚进行结晶分离、加入丙酮重结晶后进行干燥，即得到氧化槐果碱纯品。

主要参考资料

[1] CN201210259493.1 一种高纯度、高收率氧化槐果碱的制备方法

[2] 氧化槐果碱的镇痛作用 及其对小鼠中枢GABAA受体的作用

[3] 氧化槐果碱诱导SW480细胞凋亡的实验研究

[4] CN200610015532.8 氧化槐果碱及其盐类的制备方法

[5] CN201710166245.5 一种从狼牙刺花中提取氧化槐果碱的方法