超信号蛋白印迹增强剂的应用

背景^[1-6]

SuperSignal Western Blot Enhancer含有膜处理试剂和一抗稀释剂，与没有它的检测相比，它可以将信号强度和灵敏度提高3到10倍。当由于丰度低或免疫反应性差而难以检测蛋白质或抗原时，使用SuperSignal Western Blot Enhancer可显着降低背景并增强低丰度和弱免疫反应性抗原的检测。Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

Western Blot基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

SuperSignal Western Blot Enhancer的特点：

1.提高灵敏度-实现信号强度和灵敏度，提高3到10倍•提高特异性-提高质量差和低亲和力抗体的信噪比

2.更好的透明度-减少背景Western印迹

3.膜兼容性-通过PVDF和硝酸纤维素膜提供有效的信号增强

4.底物兼容性-经验证可用于显色，化学发光和荧光检测方法

应用^[7-9]

用超信号蛋白印迹增强剂可于水稻谷蛋白的质谱和Western Blot鉴定与贮藏蛋白分析：

以水稻品种93-11(Oryza sativa L.ssp.Indica cv.93-11)和日本晴(Oryza sativa L.ssp.Japonica cv.Nipponbare)为材料,鉴定和分析粳稻和籼稻的谷蛋白亚基组成。通过2D-PAGE分离谷蛋白亚基并通过软件比较各亚基组成,运用LC-MS/MS和特异性亚基抗体两种方法鉴定谷蛋白亚基。水稻的营养品质主要取决于两个方面,蛋白质含量和氨基酸含量。其中特别重要的是可消化的蛋白组成含量,以及必需氨基酸的含量。

分析水稻种子贮藏蛋白营养组成为水稻育种选取高营养组分品种提供了理论基础。以35个优质栽培水稻品种作为材料,分析不同品种的种子贮藏蛋白营养组成。通过SDS-PAGE分析种子贮藏蛋白组成,运用凯氏定氮法和Bradford方法测定蛋白含量,并测定氨基酸含量。分析结果表明,水稻贮藏蛋白通过SDS-PAGE分成清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4个组分,其中谷蛋白占50-80%绝对优势。

在营养水平上,谷蛋白易消化,其赖氨酸含量是其他组分的9倍。稻米中的蛋白含量和氨基酸含量有一定的规律：谷蛋白组分和醇溶蛋白组分呈极其显著负相关,Lys含量和总蛋白含量呈极其显著正相关(P<0.01)。运用凯氏定氮法、Bradford法、氨基酸分析以及SDS-PAGE等方法分析稻米的营养品质,总结了不同水稻品种之间营养水平的相关性,为水稻育种选取高营养品质资源提供了理论依据。

选取蛋白含量存在显著差异的5个优质栽培水稻品种作为亲本,得到4个水稻亲本子代的组合,其中包括3个籼稻组合和1个粳稻组合。通过不同品种的谷蛋白启动子序列比对和对应谷蛋白2D-PAGE图谱比较,初步分析粳稻和籼稻的谷蛋白组成和水稻组合之间谷蛋白组成差异。启动子分析结果表明,水稻谷蛋白不同亚基的启动子序列中重要转录元件排列有一定特异性；粳稻和籼稻的启动子序列具有几个特异性核苷酸突变。水稻组合谷蛋白2D-PAGE图谱结果表明：粳稻和籼稻各自的杂交组合的谷蛋白含量都具有叠加性。

参考文献

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