大鼠支气管平滑肌细胞的相关研究

背景及概述^[1]

平滑肌细胞又叫平滑肌纤维，系构成平滑肌的纤维状长细胞。由于平滑肌所分布的部位不同，平滑肌细胞的长度很不一致，在小血管壁上的平滑肌细胞长度仅有20μm左右，妊娠期子宫壁平滑肌细胞可长达500μm，位于一般器官平滑肌细胞的长度约200μm左右，此细胞的宽度在7μm以内。平滑肌细胞多聚集成束，细胞轮廓不清，需用适当浓度的酸(碱)溶液将其分离，方可获得外形完整的肌细胞。细胞内只有1个细胞核，呈椭圆形或长杆状，位于细胞中段最宽的部分，长度与纵轴平行，核染色质为纤细网状，可见2个以上核仁。在制作切片标本时，如肌细胞收缩则可变粗，核也随之变粗，甚至可出现螺旋形的扭曲。平滑肌细胞的胞质通常称为肌浆。生活状态下的胞质呈均质性，一般染色切片上不显任何结构。应用特殊染色或用三氯醋酸溶液稍加浸泡，可在胞质内显出纵列的细丝，称肌原纤维。平滑肌细胞外面包有1层肌膜。每个平滑肌细胞周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维，包绕于肌膜的表面。平滑肌细胞可随环境的改变伸长或缩短，有很大的弹性和韧力。

大鼠支气管平滑肌细胞分离自支气管组织；支气管（Bronchi），是指由支气管分出的各级分枝，由支气管分出的一级支气管，即左、右主支气管。左主支气管与右主支气管相比较，前者较细长，走向倾斜；后者较粗短，走向较前者略直，所以经支气管堕入的异物多进入右主支气管。支气管和支气管还有以区别就是，支气管是以“C”型的支气管软骨为支架，而支气管不是。大鼠支气管平滑肌细胞主要功能：①大鼠支气管平滑肌细胞能维持支气管张力，保持支气管形态；②大鼠支气管平滑肌特异的超微结构特点和调节机制是支气管正常生理功能的基础；③大鼠支气管平滑肌通过分泌细胞因子和趋化因子等促炎介质，发挥免疫调节功能。支气管平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。大鼠支气管平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

相关研究^[2-3]

有研究观察一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)是否诱导大鼠支气管平滑肌细胞(ASMCs)凋亡。方法Wistar大鼠10只，用卵白蛋白作为致敏原建立大鼠哮喘模型，分离出大鼠的气道平滑肌细胞，用SNP(NO的供体)干预，通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长率的变化，用原位末端标记法和流式细胞术检测SNP对哮喘大鼠气道平滑肌细胞细胞凋亡的影响。结果⑴MTT法测定：SNP+哮喘组的细胞抑制率明显高于哮喘组细胞存活率，(n=8，P<0.05)，且呈浓度依赖关系。⑵TUNEL(原位末端标记)法检测：SNP+哮喘组的凋亡指数明显高于哮喘组，(n=4，P<0.05)。⑶流式细胞术测定SNP+哮喘组的平滑肌细胞凋亡率明显高于哮喘组，(n=4，P<0.05)。结论为硝普钠能抑制大鼠支气管平滑肌细胞的增殖，并且能诱导哮喘大鼠气道平滑肌细胞的凋亡，这种作用可能与治疗哮喘的气道重建有关。

有研究观察射麻止喘汤对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖的影响。选用SPF级SD大鼠分为哮喘组和正常对照组，哮喘组采用卵清蛋白(OVA)致敏并激发方法复制哮喘模型，造模成功后分别取各组支气管平滑肌进行细胞培养，倒置显微镜观察形态并经免疫荧光染色鉴定；给予大鼠灌胃高、中、低剂量的射麻止喘汤(剂量分别为64、32、6.4g.kg-1.d-1)制备含药血清；取2～5代ASMC分别给予射麻止喘汤高、中、低剂量含药血清，蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波醇-12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA，10nmol/L)，PKC抑制剂马来酰亚胺甲磺酸盐(Ro-31-8220，5μmol/L)干预；另设空白组(不给予任何药物血清干预)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMC增殖(D值)。结果显示免疫荧光染色鉴定结果显示所培养的细胞为平滑肌细胞。正常大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增高(P<0.05)，Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值与空白组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。哮喘模型大鼠PMA组ASMC的D值较空白组显著增加(P<0.05)，Ro-31-8220组、射麻止喘汤各剂量组D值均较空白组显著降低(P<0.05)，但射麻止喘汤各剂量组与Ro-31-8220组比较差异无显著性意义(P>0.05)。因此射麻止喘汤治疗支气管哮喘的作用可能与其能抑制ASMC增殖，影响哮喘的气道重塑过程有关。

主要参考资料

[1] 新编实用医学词典

[2] 硝普钠诱导体外哮喘大鼠支气管平滑肌细胞凋亡

[3] 射麻止喘汤对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响