Fmoc-Val-Cit-PAB的制备

介绍

Fmoc-Val-Cit-PAB是一种在抗体药物偶联物（ADC）开发中重要的可裂解连接子。其分子式为C₃₃H₃₉N₅O₆，外观为白色至类白色粉末。其分子末端的Fmoc（笏甲氧羰基）是一个保护基团，可在偶联前选择性脱除，以便与抗体上的赖氨酸或半胱氨酸残基连接；中间的缬氨酸-瓜氨酸（Val-Cit）二肽是组织蛋白酶B（Cathepsin B）的特异性识别底物，这种酶在肿瘤细胞和溶酶体中高表达；末端的对氨基苄醇（PAB） 则是一个自降解间隔基。其作用机制是：ADC进入细胞后，溶酶体中的组织蛋白酶B会精准切割Val-Cit二肽，随后PAB基团自发降解，从而在靶细胞内特异性释放细胞毒性药物，实现精准杀伤，是实现肿瘤靶向治疗的关键工具。

图一 Fmoc-Val-Cit-PAB

制备

在室温下，将乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉（EEDQ，1.99g，8.05mmol）加入到对氨基苯甲醇（0.99g，8.05mol）的二氯甲烷（19mL）和甲醇（7.6mL）溶液中。搅拌5分钟后，一次性加入Fmoc-Valine Citrulline 7（2.0 g，4.03 mmol），并将所得溶液搅拌18小时。真空除去挥发物，用乙醚（20mL）研磨残余物，并依次用乙醚（20mg）、乙酸乙酯（20mL）和乙醚（20ml）洗涤，得到淡黄色固体状标题化合物Fmoc-Val-Cit-PAB（2.2g，98%收率）。MS（ESI，位置）：计算C33H39N5O6，601.29[1]。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.99 (s, 1H), 8.11 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.75 (m, 2H), 7.55 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.43 (m, 3H), 7.33 (m, 2H), 7.24 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.99 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.10 (m, 1H), 4.43 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 4.31 (s, 1H), 4.25 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.94 (m, 1H), 3.03-2.88 (m, 2H), 2.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 1.76-1.65 (m, 1H), 1.60 (m, 1H), 1.48-1.36 (m, 2H), 0.92-0.85 (m, 6H).

将乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氢喹啉（7.6 g，15.3 mmol）和PABOH3.76 g，30.6 mmol溶解在CH2Cl2（140 mL）和CH3OH（70 mL）中，并加入EEDQ7.5 g，30.6mmol）。将反应物在室温下搅拌14小时。反应完成后，减压除去溶剂，得到粗物质，通过柱色谱法纯化，得到白色固体化合物Fmoc-Val-Cit-PAB（8.4g，90%收率）[2]。

图二 Fmoc-Val-Cit-PAB的制备

参考文献

[1]Current Patent Assignee: REGENERON PHARMACEUTICALS - WO2021/151031, 2021, A1

[2]Hu, Xinyue, Jiang, Hailun, Bai, Weiqi, et al. Synthesis, characterization, and targeted chemotherapy of SCT200-linker-monomethyl auristatin E conjugates[J]. European Journal of Medicinal Chemistry: Chimie Therapeutique,2021,216. DOI:10.1016/j.ejmech.2021.113297