毛钩藤碱的药理作用

背景及概述^[1][2]

毛钩藤碱(Hirsutine)属四环杂育亨宾类生物碱。毛钩藤碱主要存在于钩藤属和帽柱木属植物的叶中。现代药理学研究表明，毛钩藤碱具有抗心律失常，抗心肌缺血，抗流感病毒，抗乙酰胆碱，解痉及局麻等作用与活性。文献报道Hirsutine具有抗甲型流感病毒，抑制利什曼原虫，抗心律失常等活性。

制备^[1]

1、取正品中药钩藤，粉碎成粗粉，用95％乙醇冷浸24h后渗漉提取。

2、减压回收乙醇后，用3％盐酸溶液溶解过滤。滤液用氨水碱化，用乙醚加热回流提取数次，回收溶剂，得乙醚提取液。

3、上样于硅胶(200～300目)柱，以石油醚‑醋酸乙酯梯度洗脱，所得流份再反复经硅胶柱、SephadexLH‑20柱和ODS柱色谱分离，得到毛钩藤碱。

药理作用^[3-5]

CN200910151214.8通过体外心肌细胞培养实验，结果表明，毛钩藤碱能提高细胞存活率，促进NO生成；能可降低缺氧损伤心肌细胞LDH的漏出率；能可提高SOD的活性；可以抑制脂质过氧化以及具有抑制心肌细胞凋亡的作用，实验结果表明：所述的毛钩藤碱可作为药物用于治疗心肌损伤尤其是缺氧缺糖心肌损伤心脏病。

毛钩藤碱(hirsutine，HS)是从传统中药钩藤中提取出的一种生物碱单体，具有降压、抗感染、心脏保护和抗肿瘤等药理作用。王伟等人探讨了HS对肝癌SMMC-7721细胞的促凋亡作用及其机制。方法：以终浓度分别为25、50和100μmol/L HS处理SMMC-7721细胞24h后，细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit 8，CCK8)法检测HS对SMMC-7721细胞活性的影响，流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量和细胞凋亡，蛋白质印迹法分析p-eIF2α、CHOP、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3和cleaved多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase，PARP)的表达。结果：CCK8实验显示，HS可剂量依赖性地抑制SMMC-7721细胞活力，F=44.536，P<0.001。

流式结果显示，0、25、50和100μmol/L HS作用SMMC-7721细胞24h，代表ROS含量的MIF值分别为237±13、281±15、342±12和396±16，F=46.473，P<0.001；细胞凋亡率分别为(2.5±1.2)%、(9.8±1.4)%、(17.3±2.1)%和(28.5±1.9)%，F=70.316，P<0.001。蛋白质印迹实验结果显示，100μmol/L HS作用SMMC-7721细胞24h后，促凋亡蛋白p-eIF2α、CHOP、cleaved Caspase-3和cleaved PARP表达上调，均P<0.001；抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，P=0.001。同时，eIF-2α磷酸化抑制剂Salubrinal和抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸可抑制HS的上述作用。结论： HS可通过ROS激活内质网应激，下调Bcl-2/Bax比率诱导SMMC-7721细胞凋亡。

黄器伟等人观察了毛钩藤碱对人乳腺癌细胞的抑制作用，并探讨了其分子机制。选取人正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作为研究对象，采用CCK-8法检测细胞活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential，MMP)，采用Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及胞浆中细胞色素C(cytochrome C，Cyt C)的蛋白水平。

结果显示，毛钩藤碱可显著降低MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞存活率，且该作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)；毛钩藤碱作用MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞48 h的IC50分别为447.79和179.06μmol/L；毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡和MMP去极化(P<0.05)，促进线粒体释放Cyt C(P<0.05)，激活caspase 9和caspase 3(P<0.05)，这些作用均可被线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore，MPTP)特异性阻断剂环孢素A(cyclosporin A，CsA)显著抑制(P<0.05)；此外，毛钩藤碱显著下调MDA-MB-231细胞Bcl-2蛋白水平并上调Bax蛋白水平(P<0.05)。以上结果提示，毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡，这可能与其调低Bcl-2/Bax蛋白比值，从而引起MPTP持续开放和Cyt C释放，最终导致caspase 9和caspase 3活化有关。

应用^[2]

CN201710161719.7提供了毛钩藤碱及其制剂在肺癌治疗方面的新用途，毛钩藤碱为一种副作用少，毒性低的天然抗肺癌药物。本发明通过体外肺癌培养实验，结果证明毛钩藤碱对肺癌细胞具有浓度及时间依赖性抑制其生长的作用，可通过诱导细胞线粒体损伤途径促进肺癌细胞凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型实验表明，毛钩藤碱可抑制裸鼠肿瘤的生长；同时细胞与动物实验都表明毛钩藤碱毒性低。所述的毛钩藤碱可作为治疗肺癌的新候选药物。

主要参考资料

[1] CN201010506325.9 毛钩藤碱在制备戒毒药物中的用途

[2] CN201710161719.7 毛钩藤碱的应用

[3] CN200910151214.8 毛钩藤碱在制备治疗心肌损伤药物中的用途

[4]王伟，陈伟达.毛钩藤碱诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用机制探讨[J].中华肿瘤防治杂志，2018，25(11):761-766.

[5]黄器伟，翟娜娜，黄涛，李道明.毛钩藤碱通过线粒体途径诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡[J].生理学报，2018，70(01):40-46.