N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯的合成方法及用途

简介

N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯是多肽合成专用氨基酸保护单体，常温下为白色或类白色固体粉末。该化合物易溶于二氯甲烷、四氢呋喃等有机溶剂，主要用于固相多肽合成，可以构建含游离天冬氨酸侧链羧基的肽链中间体。

N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯的性状

合成

方法一：将碱性蛋白酶交联酶聚集体加入到二烯丙基保护的氨基酸衍生物、15.0 mL tBuOH或1,4-二恶烷和15.0 mL磷酸盐缓冲液（pH 7.5，50 mM）中。在37°C下以200 rpm的速度摇晃混合物16小时。过滤混合物。将酶重新悬浮在50毫升饱和碳酸氢钠水溶液中。过滤混合物。用饱和NaHCO3水溶液重复该程序两次，用50 mL EtOAc重复两次。用饱和NaHCO3水溶液洗涤合并的有机相。用HCl水溶液（0.1N）将合并的水相酸化至pH 1。用100 mL EtOAc（3x）萃取水相。用250毫升盐水洗涤合并的有机层。用Na2SO4干燥有机层。真空浓缩有机层。通过与50 mL甲苯（2x）和50 mL CHCl3（2x”）共蒸发干燥层。用EtOAc/正己烷混合物进行柱色谱，以获得产物N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯[1]。

方法二：溶解2.1当量N-（3-二甲基氨基丙基）-N’-乙基碳二亚胺的N-保护氨基酸衍生物。HCl、2.1当量7-氮杂-N-羟基苯并三唑和2.1当量二异丙基乙胺在100 mL含4.0 mL醇衍生物的CH2Cl2中的溶液。在环境温度下搅拌混合物24小时。真空浓缩混合物以获得油。将油在100 mL EtOAc和100 mL饱和NaHCO3水溶液之间分配。用100mL饱和NaHCO3水溶液、100mL HCl水溶液（pH 1,2x）、100mL盐水洗涤有机相。真空浓缩有机相以获得油。通过制备型HPLC纯化油（使用15%的0.1 mL/L甲酸的H2O溶液和85%的0.1 mL/L甲酸的乙腈溶液作为洗脱剂），以获得产物N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯[1]。

用途

N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯可作为多肽合成单体，经微波偶联、分步脱保护、肽切割纯化等流程制备目标肽中间体。例如：将N-芴甲氧羰基-L-天冬氨酸4-烯丙酯、DIC、Oxyma溶于DMF，50℃微波偶联15 min；加哌啶/DMF脱Fmoc，50℃反应5 min，树脂经DMF洗涤后，加入含Meldrum酸、TES-H、DIPEA与Pd(PPh₃)₂Cl₂的DMF溶液脱Alloc保护，多次洗涤树脂并真空干燥。先后用DCM/HFIP软切、TFA混合试剂深度切割肽链，乙醚沉淀粗肽，真空干燥后经梯度乙腈水相HPLC纯化得目标肽中间体[2]。

参考文献

[1] Nuijens, Timo; et al. A versatile and selective chemo-enzymatic synthesis of β-protected aspartic and γ-protected glutamic acid derivatives. Tetrahedron Letters (2009), 50(23), 2719-2721.

[2] Napier, Patrick; et al. Open-Flask Protocol for the Removal of Alloc Carbamate and Allyl Ester Protecting Groups. Application to In-solution and On-resin Peptide Synthesis. Journal of Organic Chemistry (2025), 90(1), 197-201.