beta Actin Monoclonal Antibody(15G5A11/E2)的生理作用

背景^[1-3]

beta Actin Monoclonal Antibody(15G5A11/E2)是beta Actin Monoclonal作为抗原对实验动物进行免疫后筛选出只产生的beta Actin Monoclonal抗体的B淋巴细胞，再将B细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤杂交然后筛选出只分泌beta Actin Monoclonal抗体的杂交瘤细胞，最后通过层析柱纯化制的高纯度的beta Actin Monoclonal抗体。β肌动蛋白是已鉴定的六种肌动蛋白异构体之一。

生理作用^[4-7]

β肌动蛋白是所有人类细胞类型中的非肌肉细胞骨架蛋白，参与细胞运动，结构和完整性。人体中存在六种不同的肌动蛋白同种型。肌动蛋白的β同种型以及γ肌动蛋白在大多数细胞类型中共存，作为细胞骨架的组分。β肌动蛋白是在所有真核细胞中无处不在地表达的细胞质蛋白。球状肌动蛋白（G-肌动蛋白）的聚合导致两条螺旋形式的结构丝（F-肌动蛋白）。肌动蛋白是高度保守的蛋白质，参与细胞运动，结构和完整性。因为β肌动蛋白在所有真核细胞中普遍表达，所以它经常用作涉及蛋白质检测的测定的上样对照，例如Western印迹。

β-肌动蛋白抗体为研究β-肌动蛋白的细胞内分布以及细胞骨架的静态和动态方面提供了一种特殊而有用的工具。通过将各种细胞裂解物加载到4-20％Tris-HCl聚丙烯酰胺凝胶上进行β-肌动蛋白的蛋白质印迹分析。将蛋白质转移至低荧光PVDF膜并用Sea Block封闭缓冲液封闭至少1小时。用β-肌动蛋白单克隆抗体以1：500的稀释度在摇动平台上于4℃探测过夜，并在TBS-0.1％Tween-20中洗涤,使用荧光成像系统进行检测。 [192] β-肌动蛋白是肌动蛋白家族的一员，广泛表达于真核生物非肌细胞中，是构成细胞骨架和肌小节的主要成分。它具有重要的生理功能，几乎参与了真核细胞的所有生理过程，如细胞结构的维持、细胞内运动、细胞分裂等。作为一种细胞质肌动蛋白，β-肌动蛋白在所有组织中相对持续稳定表达，因此β-肌动蛋白基因常用作定量或半定量研究的对照基因。由管家基因的身份所决定，β-肌动蛋白基因的启动子为强启动子，对于提高转基因表达量具有显著效果，且其表达不受组织的限制，这两大优点使得β-肌动蛋白基因启动子在转基因动物的研究中发挥着重要的作用。

应用^[8][9]

用于细胞核肌动蛋白参与基因转录调控的分子机制研究。

肌动蛋白是一类高度保守的蛋白质,存在于所有的真核细胞中,参与细胞分裂、运动、迁移、形态的维持、生长等许多重要生理活动。有研究指出,肌动蛋白也存在于细胞核内。但由于肌动蛋白是丰富的胞质蛋白,致使这一结论受到质疑。后来,依赖生物化学、免疫荧光、免疫电子显微镜和激光共聚焦显微镜等实验技术,证明肌动蛋白普遍存在于各类细胞的细胞核中。

虽然肌动蛋白在细胞质中的功能已经被研究的很透彻,但它在细胞核内的功能还不清楚。有实验指出,肌动蛋白在核运输方面发挥作用,可能参与RNA运输及mRNA加工。肌动蛋白还能与protein 4.1共定位,可能参与核组装过程。此外,肌动蛋白还能与染色质改构复合物和乙酰转移酶复合物相互作用,在染色质结构的调整方面也发挥重要作用。越来越多的证据表明肌动蛋白也能参与基因转录的调控。在早期的实验中,微注射肌动蛋白的抗体或结合蛋白能抑制灯刷染色体的转录。肌动蛋白还能与RNA聚合酶II共纯化,对RNA聚合酶II体外的有效转录起到作用。

最近有实验指出,肌动蛋白能被募集到基因的启动子区,是转录前起始复合物的成分。但肌动蛋白在此复合物中的作用还有待于进一步研究。本文通过实验证明,RNA解旋酶A是转录前起始复合物中能够与肌动蛋白相互作用的蛋白质。我们首先通过免疫共沉淀和免疫荧光标记技术证明RNA解旋酶A在体内可以与肌动蛋白相互作用。然后利用GST pull-down实验证实RNA解旋酶A主要是通过其RGG区域与肌动蛋白作用,并且这一负显性突变体能够抑制RNA聚合酶II募集到转录前起始复合物中。此外,过表达或干涉RNA解旋酶A都能够影响RNA聚合酶II与肌动蛋白之间的相互作用,并且也能影响肌动蛋白所参与的基因表达。综上所述,RNA解旋酶A对肌动蛋白参与的转录过程起到重要调节作用。

参考文献

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