Pierce Silver Stain Kit的特性及应用

背景^[1-6]

Pierce Silver Stain for Mass Spectrometry是一套完整的试剂盒，用于快速灵敏地对聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质进行银染，并对切除的凝胶块进行高效脱色，以进行质谱分析。

特性^[1-6]

Pierce Silver Stain的特点：

•敏感和快速染色-低背景，易于使用的银染提供亚纳克敏感性，在固定后30分钟内检测每个斑点小于0.25ng的蛋白质

•灵活的染色方案-将凝胶固定15至30分钟或过夜，对染色性能没有任何影响;染色1至30分钟（通常2至3分钟）

•坚固-有效的银染，即使是难以染色的碱性蛋白质，如溶菌酶（pI 10）和胰凝乳蛋白酶原A（pI 9.2），分别可检测到0.2ng和0.5ng

•简单，无故障的斑点制备-染色切除的凝胶块中的斑点很容易脱色，并且可在一小时内进行胰蛋白酶消化。

•MS兼容的试剂和方案经过优化，可在从染色的1D或2D凝胶（SDS-PAGE）中提取肽后提供卓越的质谱性能

•完整试剂盒-包含染色和脱色前所需的所有试剂，用于凝胶内蛋白水解和肽回收，用于质谱分析

•方便-kit-components在室温下稳定;节省宝贵的冰箱空间，无需在使用前平衡试剂

银染法通常使用戊二醛或甲醛，其引起蛋白质彼此和凝胶基质的一些共价交联。在发生这种交联的程度上，将抑制从凝胶中提取或洗脱蛋白质。Pierce Silver Stain在污渍和显影剂工作溶液中使用甲醛。然而，优化伴随质谱试剂盒的程序以化多肽回收而不会大大牺牲灵敏度。

应用^[7][8]

用于急性力竭运动大鼠腓肠肌的蛋白质与蛋白质组差异性表达的研究。

运动大鼠腓肠肌蛋白质组的差异性表达特征,筛选出骨骼肌组织中对运动应激具有重要意义的差异性表达的蛋白质,探讨在蛋白质组学水平上运动性疲劳的发生机制。实验方法:10只雄性SD大鼠,按体重随机配对分为安静对照组（n=5）和运动实验组（n=5）。运动组依据Bedford所建立的大强度运动模型,运动至力竭。大鼠力竭后三小时和安静组同时做麻醉后断头处死,进行后肢腓肠肌蛋白质提取和含量测定。提取的蛋白质经过处理后进行两部分实验。章:急性力竭运动大鼠腓肠肌蛋白质差异性表达的初步研究。依次对蛋白质进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、染色、蛋白胶内原位酶解、电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析;第二章:急性力竭运动大鼠腓肠肌的比较蛋白质组研究。依次对蛋白质进行固相pH梯度—SDS双向凝胶电泳、硝酸银染色、蛋白质胶内原位酶解、基质辅助激光解吸飞行时间串连质谱分析。

部分实验结果:组织蛋白提取比较成功,Bradford蛋白定量大约40ug.ul-1。电泳显示36个条带,与安静组比较,在运动组有的条带出现了明显增宽、密度增高,有的条带出现了明显变窄、密度降低。对具有明显变化的条带进行胶内原位酶解和质谱分析显示第三条带的运动组中出现了甲胎蛋白。第二部分实验结果:安静组和运动组蛋白质斑点数目分别为667±35个和572±28。共有282个差异表达的蛋白质点。运动后消失的蛋白质点有88个,运动后新增的蛋白质点32个,运动后表达量差异。

参考文献

[1]Influence of exercise on the activity and the distribution between free and bound forms of glycolytic and associated enzymes in tissues of horse mackerel.Lushchak VI,Bagnyukova TV,Storey JM,Storey KB.Brazilian Journal of Medical and Biological Research.2001

[2]The current state of two-dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients.Gorg A,Obermaier C,Boguth G,et al.Electrophoresis.2000

[3]Carbohydrate and the cytokine response to 2.5h of running.Nehlsen-Cannarella S L,Fagoaga O R,Nieman D C,et al.Journal of Applied Physiology.1997

[4]Biology of disease:free radicals and tissue injury.Freeman BA,Crapo JD.Lab,Invest.1982

[5]Role of the C-terminal domain of Bax and Bcl-xl in their localization and function in yeast cells.Priaut M,Camougrand N,Chaudhuri B,et al.FEBS Letters.1999

[6]Research in the exercise sciences:Where do we go from here?.Baldwin KM.Journal of Applied Physiology.2000

[7]Proteomic analysis and identification of new biomarkers and therapeutic targets for invasive ovarian cancer.Jones MB,Krutzsch H,Shu H,et al.Proteomics.2002

[8]张松江.急性力竭运动大鼠腓肠肌的蛋白质与蛋白质组差异性表达的研究[D].湖南师范大学,2006.