Novex 10%Tris-Glycine Mini Gels,WedgeWell format,10-well的应用

背景^[1-3]

Novex 10%Tris-Glycine Mini Gels,WedgeWell format,10-well是基于传统Laemmli蛋白电泳的聚丙烯酰胺凝胶，可以使用Laemmli样品和运行缓冲液。Novex WedgeWell Tris-甘氨酸凝胶可将各种蛋白质重复分离到良好分辨的条带中。

Novex 10%Tris-Glycine Mini Gels,WedgeWell format,10-well不含SDS，可用于以天然或变性形式运行蛋白质。对于变性蛋白质，建议使用Novex Tris-甘氨酸SDS样品缓冲液和Novex Tris-甘氨酸SDS运行缓冲液。对于天然蛋白质，建议使用Novex Tris-Glycine Native Sample Buffer和Novex Tris-Glycine Native Running Buffer。Novex 10%Tris-Glycine Mini Gels,WedgeWell format,10-well具有创新的楔形孔，其样品负载量比其他1.0 mm厚的凝胶多两倍。楔形井也有较大的开口，使样品装载更容易。为了将蛋白质转移到膜上，建议在使用Invitrogen Mini Blot模块进行传统湿转移时使用Novex Tris-Glycine Transfer Buffer。也可以使用Invitrogen Power Blotter进行快速半干转移或使用iBlot 2凝胶转移装置进行快速干转移。

特点^[4-6]

改进的货架寿命存储凝胶，在4°C下长达12个月。

多样性用于天然和变性蛋白质分析。

楔形孔-容易加载多达两倍的样品体积。

快速运行条件-在不到60分钟的时间内使用恒定电压快速分离蛋白质。

应用^[7][8]

用于内毒素导致的肺肾损伤和西洛他唑减轻肺肾损伤的实验研究。脓毒症，是临床上死亡率较高的疾病之一，在临床各科室尤其是呼吸科、ICU科中发病率很高。临床上导致败血症的细菌有很多种，以大肠埃希菌更为常见，且死亡率很高。脓毒症导致患者死亡的最主要原因是导致急性多器官功能损伤，最终导致多器官功能衰竭死亡。对于脓毒症的发病机制及治疗的探讨目前仍然是国内外研究的热门问题，希望通过对机制的研究，为临床治疗脓毒症提供有效的辅助治疗药物。参与急性炎症的主要细胞成分有中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等。常见的炎症因子有白介素（IL）、肿瘤坏死因子（TNF）、血小板活化因子（PAF）、前列腺素等。

血管反应被认为是炎症过程的中心环节。在脓毒症中，中性粒细胞等炎症细胞激活，可导致多种促炎症因子及粘附分子增多，血管通透性增高，白细胞渗出并导致组织水肿和炎症。内毒素导致的炎症反应的主要信号通路有NF-kB pathway，MAPK/ERKpathway等等。NF-kB可与多种基因启动子或增强子部位的kB位点特异性结合，促进基因转录，是炎症反应的主要介质和转录因子。MAPK的持续激活可以导致炎症因子不断产生，诱导“瀑布”效应，引起炎症持续及损伤不断加重。其中较为重要的是p38MAPK信号，它与NF-kB pathway关系密切，是激活NF-kB pathway的主要因素。

活化的NF-kB pathway和p38MAPK pathway可以导致炎症因子瀑布式级联反应、氧自由基增多，导致细胞损伤甚至死亡。西洛他唑是常见的一种抗血小板凝集的药物，在近期国内外的很多实验中均证明西洛他唑对于减轻炎症损伤具有重要作用。为了进一步研究LPS诱导的脓毒症进展过程中的炎症改变情况，进一步研究西洛他唑减轻LPS诱导的肺肾损伤的机制，以C57小鼠为研究对象，通过腹腔内注射LPS的方法制作脓毒症模型，并通过西洛他唑腹腔内注射的方法进行研究，应用病理及免疫荧光染色、ELISA、Western Blot等方法进行检测。通过腹腔内注射内毒素（LPS）的方法，成功制作了脓毒症的模型。通过实验发现，在LPS诱导的脓毒症模型早期，病理上主要以炎症细胞浸润为主，炎症细胞透过血管壁向组织内浸润，局部血管上皮及组织细胞损伤，但对于组织整体结构的破坏并不明显。肺组织及肾脏功能损伤，肺组织MPO6小时和24小时均明显增高，但两者无统计学差异，肾功能BUN水平随时间推移，明显增高。促炎症细胞因子IL-6和TNF-α均明显增高，IL-66小时和24小时增加量无明显统计差异，而TNF-α6小时含量高于24小时；Mst-1随时间推移，明显减少。

参考文献

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[4]Induction of heme oxygenase-1 expression by cilostazol contributes to its anti-inflammatory effects in J774 murine macrophages[J].So Youn Park,Sung Won Lee,Seung Hoon Baek,Seung Jin Lee,Won Suk Lee,Byung Yong Rhim,Ki Whan Hong,Chi Dae Kim.Immunology Letters.2011(2)

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[8]胡娱新.内毒素导致的肺肾损伤和西洛他唑减轻肺肾损伤的实验研究[D].吉林大学,2015.