开环异落叶松树脂酚的药理作用

背景及概述^[1][2]

亚麻籽中含有大量的木质素——开环异落叶松树脂酚(SECO)，SECO 以其糖苷形式存在，即开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG )。开环异落叶松树脂酚是肠道菌转化木质素的中间产物，故其作为功能食品添加到食品中更易于吸收，对人体更加有益，且其具有较强的抗氧化性、预防乳腺癌、抑制糖尿病及减轻妇女绝经期症状等生理活性。

制备^[1][4]

方法一、

1 .SDG 水解酶的提取

将菌种 Asp . oryzae 39 接种于麦麸培养基中，30 ℃摇瓶培养 5～7 d 。向培养好的菌中加入5 倍体积的 20 m mol/L、pH 5.0 的醋酸缓冲液,搅拌浸泡 1～2 h，过滤离心，取上清液，然后用硫铵将蛋白沉淀，用20 mmol/L、pH5. 0 的醋酸缓冲液溶解蛋白，得到粗酶液。

2 . 反相高效液相色谱法测定 SECO 含量

称量样品 4 mg 溶于10 mL 甲醇，超声处理5 min。HPLC条件: 流动相为乙腈( A) -0. 1 % H₃PO₄水( B) 洗脱体系，等度洗脱,流动相 A 与B 体积比为2∶8，ODS( C18) 色谱柱( 4 . 6 m m ×250 mm)，柱温 35℃，体积流量 1 m L/min , 进样量 20μL 。

从菌株 Asp . oryzae 39 提取获得SDG水解酶，以此酶与底物SDG 进行酶反应，底物质量浓度为30 m g/m L、温度为 40℃、pH 5.0 的条件下，反应 8 h，为制备SECO的条件。用萃取法分离纯化产物 SECO，产物得率达到 90 %，而且操作简单易行。

方法二、CN200610012700.8公开了一种由亚麻籽制备脱水开环异落叶松树脂酚的方法。是将亚麻籽与60~100wt%的醇或酮的水溶液按1∶2~8的重量比混合提取木酚素，得到提取液。提取液浓缩至原来体积的1/16~1/12，配成含碱量为1~3M的碱性溶液，水解1~3小时，水解液调节pH至2~4，用弱极性溶剂萃取至有机相呈无色，分液得到水相；将水相配成含酸量为1~2M的酸溶液，在90~100℃下，酸解2~3小时，水解液调节pH值为2~4，用弱极性溶剂萃取其中的脱水开环异落叶松树脂酚，有机相蒸干；蒸干所得物经过脱色，结晶，过滤，得到所要产品。本发明具有操作方便，工艺简单，分离成本低，处理量大，便于批量生产的优点。

药理作用^{[2] [3] [5]}

杨宏志研究了亚麻木酚素(开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷,SDG)对线粒体肿胀的抑制作用,对DNA损伤的修复作用,对小鼠体内过氧化氢酶(CAT)活性、脂质过氧化产物(MDA)含量的影响。研究结果表明SDG对线粒体肿胀表现出良好的抑制作用,在质量浓度0.5μg/mL以下,其对线粒体肿胀的抑制作用与浓度呈现正相关;对于自由基所致的DNA损伤具有一定的修复能力,修复作用与浓度呈一定的相关性;SDG能明显提高小鼠脏器中CAT的活力,显著降低小鼠肝脏和肾脏中脂质过氧化产物(MDA)的含量。

张文斌等人研究了开环异落叶松树脂酚(SECO)及其代谢产物肠内酯(ENL)、肠二醇(END)对人乳腺癌MCF-7细胞株增殖的影响,揭示其可能的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定SECO、END与ENL对MCF-7细胞增殖的影响,并与染料木黄酮(GEN)进行对比。采用光学显微镜与流式细胞仪(FCM)检测了MCF-7细胞生长过程中受到的影响,分析了SECO抗乳腺癌的作用机制。结果低浓度SECO对MCF-7细胞增殖起促进作用,高浓度SECO对MCF-7细胞增殖起明显的抑制作用;呈现G2/M期阻滞。光学显微镜观察到细胞凋亡的形态。ENL与END则在不同浓度下均表现出抑制作用。结论：SECO对MCF-7细胞的增殖具有浓度依赖效应,其抑制MCF-7细胞增殖作用可能与其代谢产物有关。

姚广印等人探讨了开环异落叶松树脂酚(secoisolariciresinol,SECO)对卵巢摘除(ovariectomy,OVX)小鼠抗更年期抑郁的机制。方法:利用OVX小鼠建立更年期抑郁模型,通过悬尾实验和强迫游泳实验,检测SECO抗抑郁效果。通过检测脑源性神经生长因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在小鼠海马区m RNA和蛋白水平的表达,Akt和p Akt在海马区的蛋白水平的表达以及Brd U标记的新生细胞的数量,探讨SECO的抗抑郁机制。结果:SECO(10、20 mg·kg-1)能显著减少OVX小鼠的悬尾不动时间和强迫游泳不动时间,具有抗抑郁效果。给予SECO后,小鼠海马区BDNF m RNA和蛋白水平与模型组相比显著升高,免疫荧光结果显示BDNF在海马CA1、CA3及DG区的表达增多(P<0.05)。同时,海马区的新生神经细胞数量增多以及p Akt表达升高。结论:SECO通过BDNF介导的Akt/p Akt信号通路显示出抗抑郁效果,其作为潜在的治疗更年期抑郁药物具有良好的应用前景。

主要参考资料

[1] 钟瑜,王旭,马莹莹,张春枝.酶法制备开环异落叶松树脂酚[J].大连工业大学学报,2009,28(04):255-257.

[2] 杨宏志,李静,陈明星.开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)抗氧化活性研究[J].中国食品学报,2012,12(08):73-77.

[3] 张文斌,王璋,杨瑞金,卢蓉蓉,许时婴.开环异落叶松树脂酚对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响[J].营养学报,2008(05):495-498.

[4]CN200610012700.8一种由亚麻籽制备脱水开环异落叶松树脂酚的方法

[5]姚广印,姬丹阳,周卫东,姚海燕,库宝善,杨东辉.开环异落叶松树脂酚改善卵巢摘除小鼠抑郁行为及调控海马BDNF表达的研究（英文）[J].神经药理学报,2013,3(02):13-25.