大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA试剂盒

背景^[1-6]

大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠S100B蛋白（S-100B）水平。用纯化的大鼠S100B蛋白（S-100B）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入S100B蛋白（S-100B），再与HRP标记的S100B蛋白（S-100B）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的S100B蛋白（S-100B）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠S100B蛋白（S-100B）浓度。

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

标本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

应用^[7][8]

大鼠S100B蛋白(S100B)ELISA试剂盒可用于新生大鼠缺氧缺血性脑病血清S100B蛋白表达变化的实验研究：

建立新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型，通过检测不同时间点血清S100B蛋白水平，探讨血清S100B蛋白的表达在新生SD大鼠缺氧缺血性脑病中的早期诊断价值，同时探索S100B蛋白在新生SD大鼠缺氧缺血性脑病后的出现时间、出现峰值时间及消失时间，从而进一步为临床新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿的早期诊断及确定HIE后S100B蛋白采血时间提供实验依据。

方法：清洁级，封闭群，健康新生7日龄SD大鼠168只，雌雄不限，体重12～18g，随机分为3组：假手术组，HIBD模型组，健康对照组，每组各56只，HIBD模型组采用改良Rice法制备HIBD模型。根据动物处死时间不同HIBD组又随机分为7个亚组：0h组、6h组、12h组、24h组、48h组、72h及96h组，每亚组各8只。假手术组及正常对照组也在相应时间点分为7组，每组8只。各组大鼠在相应的时间点断头取血后处死，收集血液及脑组织标本。

观察各组运动行为学变化、脑组织形态学变化及HE染色；双抗夹心ELISA法检测血中S100B蛋白的变化。

结果：(1)7日龄SD大鼠在HIBD组建模后出现不同程度的行为异常，正常对照组与假手术组鼠未见异常行为(2)正常对照组、假手术组脑组织外观正常，两侧对称，无水肿、萎缩及坏死；HIBD模型组在建模后各时间点肉眼观脑组织大体形态出现不同程度的异常改变(3)HE染色：正常对照组、假手术组脑组织和HIBD模型组在建模后0h脑细胞层次清楚、细胞形态正常；HIBD模型组在建模后6h出现不同程度的神经细胞水肿、变性；12h、24h脑组织出现淤血水肿和血管充血；48h、72h神经细胞出现不同程度的坏死，细胞核碎裂、溶解；96h细胞出现大片状，细胞核碎裂、溶解。

(4)血清中S100B蛋白的表达：HIBD组0h时间点组与正常对照组、假手术组比较血清中S100B蛋白差异无统计学意义（P>0.05）；HIBD组（0h、96h时间点组除外）、与正常对照组、假手术组比较各个时间点血清中S100B蛋白值显著升高（P<0.05），差异有统计学意义；HIBD组48h时间点组分别与HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组比较血清中S100B蛋白值显著升高（P<0.05），差异有统计学意义；HIBD组6h、12h、24h、72h时间点组组间比较血清中S100B蛋白值差异无统计学意义（P>0.05）。

参考文献

[1]Identification of a Dimeric Intermediate in the Unfolding Pathway for the Calcium-Binding Protein S100B[J].Gary S.Shaw,Nicole M.Marlatt,Peter L.Ferguson,Kathryn R.Barber,Stephen P.Bottomley.Journal of Molecular Biology.2008(4)

[2]Relationship between cerebrospinal and peripheral S100B levels after focal cerebral ischemia in rats[J].Yu Tanaka,Toshiyuki Marumo,Tomohiro Omura,Shigeru Yoshida.Neuroscience Letters.2008(1)

[3]Umbilical artery blood S100βprotein:a tool for the early identification of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy[J].Jing Qian,Dong Zhou,Yu-Wei Wang.European Journal of Pediatrics.2009(1)

[4]Prognosis Value of Plasma S100B Protein Levels after Subarachnoid Aneurysmal Hemorrhage[J].Anesthesiology.2006(4)

[5]HYPOXIC-ISCHEMIC ENCEPHALOPATHY IN INFANTS:NEW CHALLENGES[J].Maria Gieron-Korthals,José,Coló,n.Fetal&Pediatric Pathology.2005(2)

[6]Peripheral markers of blood–brain barrier damage[J].Nicola Marchi,Marco Cavaglia,Vincent Fazio,Sunil Bhudia,Kerri Hallene,Damir Janigro.Clinica Chimica Acta.2004(1)

[7]Urinary S100B protein measurements:A tool for the early identification of hypoxic-ischemic encephalopathy in asphyxiated full-term infants[J].Diego Gazzolo,Emanuela Marinoni,Romolo Di Iorio,Matteo Bruschettini,Maria Kornacka,Mario Lituania,Urszula Majewska,Giovanni Serra,Fabrizio Michetti.Critical Care Medicine.2004(1)

[8]冯敏.新生大鼠缺氧缺血性脑病血清S100B蛋白表达变化的实验研究[D].蚌埠医学院,2012.