实验室常用的PBS磷酸盐缓冲液

在实验中，经常会用到PB缓冲液和PBS缓冲液，那什么是PB和PBS？

PB 是phosphate buffer的缩写，一般称为“磷酸盐缓冲溶液”，依靠磷酸缓冲对（H2PO4-和HPO42-）起到维持溶液pH值的作用，阳离子则一般是Na+或K+。 

PBS 是phosphate buffer saline的缩写，中文通常称为“磷酸盐缓冲盐溶液”，更准确地译名应该是“磷酸盐缓冲生理盐水”，是生化实验广泛使用的一种缓冲溶液。通常是在PB的基础上加入0.9% NaCl，拥有和人体体液类似的渗透压和pH值。有时为了满足其它需求，需加入K+、Ca2+或Mg2+。这个时候就需要用到D-PBS（Dulbecco′s Phosphate Buffered Saline，杜氏磷酸盐缓冲盐水），相对于PBS，其中磷酸二氢钾浓度降低，避免与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子生成沉淀。

缓冲pH范围:

磷酸缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛，可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。

酸性缓冲液：可直接用NaH2PO4或KH2PO4，pH范围在1-5；

碱性缓冲液：可直接用Na2HPO4或K2HPO4，pH范围在9-12；

中性缓冲液：用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液按照不同比例进行混合，pH在5.5-8.5。

浓度计算:

通常所说的磷酸缓冲液的浓度，比如0.1M、0.01M，指的是溶液中含有的所有磷酸根离子的浓度，包括解离的和未解离的，而不是Na+或者K+的浓度。正是因为如此，在配制中性缓冲液时，用等浓度的H2PO4-和HPO42-溶液混合，并不影响磷酸根离子的浓度。

配置方法:

PBS的配置方案有很多，Cold Spring Harbor Protocols Recipe如下所示：理论上需要调pH值，但在实际操作中，用超纯水配置后，pH就在7.2-7.24之间，通常不用调pH。

1×PBS配置方法（1L）：按上表称取物质，溶于800ml水中，然后定容至1L。

由于使用量比较大，频率比较高，所以我们一般都会配置10×或者20×的母液，使用的时候直接稀释，这样比较方便。

10×PBS配置方法（1L）：按上表称取物质，溶于800ml水中，然后定容至1L。使用的时候稀释10倍即可。

各种pH值的 0.2M PB（100ml）配方 ：

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。

Na2HPO4·12H2O分子量 = 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。

Na2HPO4·2H2O分子量 = 156.03，0.2 mol/L溶液为31.21克/升。

磷酸缓冲液优缺点:

优点：易配制各种浓度的缓冲液；适用的pH值范围宽，可配置各种pH值的缓冲液；pH受温度影响较小；缓冲能力强，缓冲液被稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。

缺点：浓度偏高时易与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子缔合形成沉淀；会抑制某些生化反应过程，如抑制某些酶(磷酸酯酶等)的催化过程。