小型DNA清洁磁珠

背景^[1-7]

Smarter DNA Clean Beads基于SPRI（Solid Phase Reverse Immobilization）原理制备，采用超顺型磁珠，配合独特的缓冲体系，提供了一种简单、快速、高效的DNA回收方法。本产品可特异性吸附DNA，回收低至50 bp的DNA片段，并有效去除引物二聚体、dNTP、无机盐及蛋白质等杂质，得到高质量的DNA回收产物。

磁珠经过不同功能基团的有效包被，可实现对核酸的高通量、自动化提取，已广泛应用于基因测序、分子诊断等领域。根据目前市场磁珠需求，集中专业科研人员，致力于磁珠系列产品的创新开发，目前已经拥有多款核酸磁珠类产品，可应用于基因测序、PCR、克隆等多种实验。

·适用范围广：50 bp-20 kb DNA-片段；

·回收率高：高达85%以上；

·纯化力好：DNA产物A260/280=1.8-2.0；

·操作简便：30 min内完成整个操作流程，无需反复离心；

·应用多样：PCR产物纯化、酶切产物纯化、cfDNA回收、NGS建库产物回收；

·产物下游应用：酶切、连接、克隆、NGS建库等。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3）80%乙醇需现用现配，否则将影响回收效率。

4）进行长度分选时，初始样品体积需≥100μL，不足时请用超纯水补齐。样品体积太小，将导致移液误差增大，进而影响分选的准确性。

使用方法

1）将磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2）涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。

3）按下表吸取不同比例的Hieff NGSTM Smarter DNA Clean Beads至DNA溶液中，室温孵育5 min。

4）将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约5 min），小心移除上清。

5）保持PCR管始终置于磁力架中，加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec后，小心移除上清。

6）重复步骤5，总计漂洗2次。

7）保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂（约5 min）。8）将PCR管从磁力架中取出，加入21μL ddH2O(≥20μL)，涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置5 min。

9）将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约5 min），小心移取20μL上清至新PCR管中，勿触碰磁珠。

10）检测DNA浓度与纯化效果。

应用^[8][9]

小型DNA清洁磁珠可用于提取实验中的DNA纯化：

为建立以磁分离技术为核心的分离系统,探索Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠的制备条件,并以多种材料DNA提取的方法测试磁珠的生物学应用性能,尤其探索了对于复杂PCR产物纯化条件下片段筛选的技术可行性。Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠纯化DNA的研究：Fe3O4/SiO复合纳米磁珠与核酸物质进行提纯测试实验,包括质粒DNA提取和分离、PCR产物纯化,对磁珠的吸附和洗脱DNA性能进行研究,其中重点研究了如何调整“磁珠缓冲液”体系以实现对于不同大小DNA片段的选择性回收。

结果：1、本论文成功制备出Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠,将其应用于分子生物学实验中得出,该磁珠提取的质粒DNA的回收量和回收纯度与商用试剂盒相当甚至超过它,并适应于下游分子生物学实验应用的要求。2、在使用Fe3O4/SiO2复合纳米磁珠进行扩增产物的纯化回收的实验中,通过对“磁珠+缓冲液”体系的研究,成功建立了对不同片段长度DNA的选择性回收的技术体系：以“磁珠溶液体积：DNA样品体积”的体积比为参数,该参数为0.4-0.5时能有效去除400bp及其以下DNA片段；该参数为0.6时能有效去除200bp及其以下DNA片段；该参数为0.7-1.2时能有效去除100bp及其以下DNA片段；该参数为1.3-1.8时能有效去除100bp以下DNA片段。

参考文献

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[2]Application of superparamagnetic nanoparticles in purification of plasmid DNA from bacterial cells[J].Chen-Li Chiang,Ching-Shan Sung,Ting-Feng Wu,Chuh-Yean Chen,Chiung-Yuen Hsu.Journal of Chromatography B.2005(1)

[3]Processing,properties and some novel applications of magnetic nanoparticles[J].D.Bahadur,J.Giri,Bibhuti B.Nayak,T.Sriharsha,P.Pradhan,N.K.Prasad,K.C.Barick,R.D.Ambashta.Pramana.2005(4)

[4]Microwave hydrothermal preparation of submicron-sized spherical magnetite(Fe 3 O 4)powders[J].Y.B Khollam,S.R Dhage,H.S Potdar,S.B Deshpande,P.P Bakare,S.D Kulkarni,S.K Date.Materials Letters.2002(4)

[5]Development of a novel method for operating magnetic particles,Magtration Technology,and its use for automating nucleic acid purification[J].Kimimichi Obata,Osamu Segawa,Mitsuru Yakabe,Yoshikazu Ishida,Toshihiro Kuroita,Katsunori Ikeda,Bunsei Kawakami,Yoshihisa Kawamura,Masafumi Yohda,Tadashi Matsunaga,Hideji Tajima.Journal of Bioscience and Bioengineering.2001(5)

[6]A new simple hydrothermal preparation of nanocrystalline magnetite Fe 3 O 4[J].R Fan,X.H Chen,Z Gui,L Liu,Z.Y Chen.Materials Research Bulletin.2001(3)

[7]Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles Used as MRI Contrast Agents:A Parametric Study[J].Journal of Colloid And Interface Science.1999(2)

[8]Synthetic process to control the total size and component distribution of multilayer magnetic composite particles[J].K.Furusawa,K.Nagashima,C.Anzai.Colloid&Polymer Science.1994(9)

[9]王燮.Fe_3O_4/SiO_2复合纳米磁珠制备技术的优化及用于DNA分离纯化的研究[D].北京化工大学,2014.