没食子儿茶素没食子酸酯的制备

背景及概述^[1]

茶叶中的儿茶素主要为表型儿茶素，即表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表没食子儿茶素EGC、表儿茶素没食子酸酯ECG、表儿茶素EC，它们约占儿茶素总量的60~80%。其中EGCG是绿茶茶多酚中含量最高的物质，也是目前公认的茶叶中最主要的抗氧化成分。然而现有研究已经证实，表型儿茶素的异构体如没食子儿茶素没食子酸酯GCG等在某些方面表现出较强的生理活性，如抗氧化和清除自由基活性等。儿茶素单体化合物主要是从茶叶或茶叶提取物中进行提取，常用的分离纯化方法有液液萃取、柱层析、中低压柱色谱、高压制备液相色谱和高速逆流色谱分离等。儿茶素的分离纯化不乏其他方法，也常常采用两种或多种方法联合使用。文献及专利中常见表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG、表儿茶素没食子酸酯ECG等的分离纯化报道，但制备没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物的方法较少。

公开专利采用柱层析的方法纯化制备单体儿茶素，如没食子儿茶素没食子酸酯GCG，但茶叶中没食子儿茶素没食子酸酯GCG含量较低，该方法提取效率不高。公开专利以儿茶素单体化合物为原料，经高温加压热转化和凝胶介质分离等过程制备非表型儿茶素。如以表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG为原料，得到纯度99.1%的没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物，但该方法所用原料成本高；同时，在转化过程中加入钠盐或钾盐的碱金属，引入了无机盐等杂质，且采用凝胶分离纯化的方法，所制备的单体化合物纯度较低。鉴于没食子儿茶素没食子酸酯GCG良好的营养保健和生理药理作用，在茶叶及茶叶相关制品的质量控制、生产工艺的优化及其基础功效学的研究过程中，需要高纯度的没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物。

制备^[1]

高纯度没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物的制备如下：称取30g绿茶茶多酚（总儿茶素含量>98%，咖啡因含量<0.05%）样品，加1000mL超纯水搅拌超声溶解，置于密闭容器于130 ̊C烘箱高温转化120min。取适量高温转化液，用0.22μm微孔滤膜过滤，进行快速制备液相色谱分离。快速制备液相色谱柱为C18型填料，填料质量为120g，粒径为20~40μm。分离条件为：流动相A：甲醇，流动相B：含0.1%（体积比）乙酸的水溶液；流速：50mL/min；梯度洗脱：15%A(0min)–20%A(5min)–25%A(10min)–30%A(25min)–35%A(30min)–50%A(40min)；上样量：3mL；检测波长：278nm。收集23.5~25.8min的没食子儿茶素没食子酸酯GCG馏分，采用高效液相色谱法检测馏分纯度，为90.12%。多次进样，收集合并没食子儿茶素没食子酸酯GCG馏分，于60 ̊C旋转蒸发除去甲醇并回收，浓缩液再经过冷冻干燥，制得没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物粗品。

称取适量没食子儿茶素没食子酸酯GCG单体化合物粗品，用25%（体积比）甲醇水溶液稀释，配制浓度为40mg/mL的溶液，进行高压制备液相色谱分离。高压制备液相色谱分离条件为：色谱柱：C18，10μm，21.5*250mm；流动相A：甲醇；流动相B：含0.1%（体积比）乙酸的水溶液；等度洗脱：25%A；流速：25mL/min；上样量：2mL；检测波长：278nm。没收集并合并没食子儿茶素没食子酸酯GCG馏分，采用高效液相色谱法检测馏分纯度，为99.52%。没食子儿茶素没食子酸酯GCG馏分于60 ̊C旋转蒸发除去甲醇并回收，浓缩液再经过冷冻干燥和真空干燥，制得没食子儿茶素没食子酸酯GCG高纯单体化合物。对上述制备的没食子儿茶素没食子酸酯GCG高纯单体化合物，再次进行高效液相色谱纯度检测，为99.51%。

主要参考资料

[1] CN201610129512.7一种制备高纯度没食子儿茶素没食子酸酯GCG的方法