酵母葡聚糖含量的检测方法

背景及概述^[1][2]

酵母葡聚糖是一种拥有良好生理功能的免疫调节剂（非特异性免疫增强剂），具有增强免疫力、抗肿瘤、抗菌消炎、抗氧化、促进伤口愈合、抗辐射、降低血脂等生理功效。从酵母细胞壁提取得到的酵母葡聚糖是不溶于水的，通过饲料添加剂方式添加在饲料中，能增强动物免疫力，改善动物健康状况，增加其抗应激能力，从而提高生产性能，增加经济效益。

制备^[1]

一种可溶性酵母葡聚糖的制备方法。采用本方法制备的酵母葡聚糖可以有效溶于水中，并具有优良的免疫活性，同时本方法具有简便、快速、高效、不使用有机溶剂和强酸、强碱试剂的特点。制备方法，采用机械化学方法，在固相体系中，通过固态化学反应对酵母葡聚糖进行化学修饰和改性。具体过程如下：

（1）将粉末状酵母葡聚糖原料与固态小分子修饰试剂按质量比1:1~10混合好后，采用机械化学方法处理4~60min；

（2）将步骤（1）处理后得到的葡聚糖混合物溶于水中得到溶解液，葡聚糖混合物与水的质量比为1:5~20；如果产生沉淀，则通过离心除去不溶物，从而得到溶解液；

（3）对步骤（2）得到的溶解液进行透析或超滤，除去多余的修饰试剂，得到酵母葡聚糖溶液。

实施例1：机械化学法制备磷酸化酵母葡聚糖方案1

酵母葡聚糖与磷酸钙以质量比1:1混合均匀后，采用行星磨进行机械化学处理，功率为900 W，处理时间为4 min；处理后的酵母葡聚糖混合物以质量比1:5溶解于水后，使用离心机在4000 rpm转速下离心20 min，其中42%的酵母葡聚糖溶于水，58%的酵母葡聚糖不溶于水；将溶于水的溶解液用水进行多次透析，以除去多余的磷酸化合物。透析后的酵母葡聚糖浓度为12.1 mg/ml，磷酸基团取代度为0.4%。

本发明制备方法属于机械化学方法，机械化学是一种不同于热化学、电化学和光化学的第四种化学活化形式，是指固体颗粒物质在摩擦、碰撞、冲击、剪切等机械力作用下，使晶体结构及物化性能发生改变，把机械能高效转化成固体物质内能，提高固体物质化学活性，反应过程只需低反应温度和较低的能量消耗，并且可以实现清洁生产。

应用^[3]

CN201210444971.6报道了一种酵母葡聚糖铜锣烧及其制作方法，所述酵母葡聚糖铜锣烧包括两片圆盘状饼皮和夹在两饼皮间的馅料，采用本发明制作方法制得的铜锣烧相对于传统配方在饼皮中添加了酵母葡聚糖这种功能性成分，使铜锣烧具有增强免疫力、抗辐射和调节血脂的功能，更加营养健康。还可以在配方中加入发芽米粉与传统的面粉配合使用，增加维生素、矿物质和微量元素，辅助并增强酵母葡聚糖的降血脂作用。也可以辅以其它风味物质，例如朗姆酒、奶油来调节口感，使本发明的铜锣烧兼具口感风味和功能性。

检测方法^[4]

一种酵母葡聚糖含量检测方法，采用高效液相色谱分析(HPLC)进行检测，HPLC的色谱条件为：采用糖柱或氨基柱，以纯化水或乙腈水溶液作为流动相进行等度洗脱，根据HPLC检测结果，获得酵母葡聚糖含量。

a)绘制标准曲线：准确称取葡萄糖标准品用水溶解并定容，然后稀释成不同浓度，用液相色谱分析仪测定得到葡萄糖标准曲线。

b)提取：将待测样品和氢氧化钠加入纯净水与无水乙醇的混合溶剂中，摇匀后在 沸水浴中加热；然后立即进行离心，去除上清液，沉淀加入40～50℃的纯水中涡旋混匀，去 除上清液，得到供试品；

c)样品水解处理：将盐酸溶液加入步骤b)中得到的沉淀中，涡旋、混合均匀，得到 均质的悬浮液，然后将悬浮液置于30℃水浴中加热45分钟，然后将其放入115℃烘箱中，加 热1小时，取出后迅速冷却；将冷却后的水解液用氢氧化钠溶液调节至pH 6～7，并加水定容并用滤膜过滤。

d)在与标准溶液相同的色谱条件下，将过膜后的样品溶液和对照品溶液分别注入 色谱仪中，记录各色谱峰的保留时间和峰面积。采用保留时间进行定性，峰面积进行定量；

e)计算获得待测样品中酵母葡聚糖的含量。

主要参考资料

[1] CN201210336178.4一种可溶性酵母葡聚糖的制备方法

[2] CN201010581329.3 一种兽用酵母葡聚糖注射液

[3] CN201210444971.6一种酵母葡聚糖铜锣烧及其制作方法

[4] CN201711191160.9 一种添加在蛋白粉中酵母葡聚糖的检测方法