人BCL2关联死亡启动子(BAD)ELISA检测试剂盒应用及检测原理

背景及概述

Bcl2关联死亡启动子(BAD)是Bcl-2基因家族的一个促凋亡成员，参与启动凋亡。BAD是Bcl-2家族的一个亚家族--纯BH3家族的成员。它不像Bcl-2家族的大多数其他成员那样，包含一个用于线粒体外膜和核包膜靶向的C端跨膜结构域。激活后，它能与抗凋亡蛋白形成异源二聚体，并阻止它们停止凋亡。

应用

人BCL2关联死亡启动子（BAD）ELISA检测试剂盒是一种用于定量检测人血清、血浆或其他生物液体样本中BAD蛋白含量的免疫学检测工具。它基于酶联免疫吸附测定（ELISA）原理，具有高灵敏度、高特异性和操作相对简便的特点。参考文献[1]描述在肾脏疾病研究中，使用了Western blot等方法检测BAD的表达和磷酸化，简述如何使用ELISA试剂盒进行定量分析。

图1 人BCL2关联死亡启动子(BAD)ELISA检测标准曲线

检测原理（以常见的双抗体夹心法为例）

包被：微孔板孔壁预先包被了抗人BAD的特异性捕获抗体。

加样：将待测样本、标准品（已知浓度的BAD）和对照品加入孔中。样本中的BAD蛋白会被捕获抗体特异性地结合在孔壁上。

洗涤：洗去未结合的其他物质。

加检测抗体：加入生物素标记的抗人BAD检测抗体，该抗体与BAD蛋白的另一位点结合，形成“捕获抗体-BAD-检测抗体”的夹心复合物。

再次洗涤：洗去未结合的检测抗体。

加链霉素亲和素-HRP：加入链霉素亲和素标记的辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）。链霉素亲和素会与生物素特异性结合，从而使HRP固定在复合物上。

三次洗涤：彻底洗去未结合的酶标物，避免假阳性。

加底物（TMB）：加入显色底物TMB（四甲基联苯胺）。HRP催化无色的TMB转化为蓝色的产物。

终止反应：加入终止液（通常是稀硫酸），反应停止，颜色由蓝变黄。

读数：在酶标仪上于450nm波长（主要）和570nm或630nm（校正）下测量各孔的吸光度（OD值）。

定量分析：标准品的OD值与其浓度呈正相关，可绘制出标准曲线。通过标准曲线，即可精确计算出待测样本中BAD的浓度。

参考文献

[1]Yu CC, et al. Role of Bad in podocyte apoptosis induced by puromycin aminonucleoside.[J] Journal of the American Society of Nephrology. 2006 Feb;17(2):461-9.