牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)的应用

背景^[1-3]

牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)适用于检测全血等样本中的牛腺病毒3型(BAV-3)，用于牛腺病毒3型(BAV-3)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。

牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)是根据BAV-3核酸序列的保守区pol蛋白酶设计引物，定制的一种检测BAV-3的荧光定量PCR试剂盒。牛血清的质量控制标准中有一项重要的指标是病毒的检测。比较常见的易感染奶牛和肉牛的病毒如DNA病毒：牛腺病毒3型（Bobine Adenovirus Type 3，BAV-3），主要引起牛的呼吸道和肠道疾病，其主要特征为肺炎、肠炎、结膜炎和多发性关节炎，是犊牛死亡的重要原因之一。其易感和潜伏性给畜牧业及其国际贸易带来严重的经济损失，同时，给细胞培养以及相关基础研究带来一定的问题。因此，病毒的快速检测是控制牛血清质量的前提，除了传统的培养传代观察细胞病变，血清学诊断技术外，在这里引入荧光定量PCR的方法，来快速检测血清样品中是否污染有BAV-3。

牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)

牛腺病毒3型PCR检测试剂盒(荧光定量法)产品特点：

1.即开即用，用户只需要提供DNA模板即可使用。2.快捷，整个PCR过程只要一小时。3.灵敏度达达100copies/reactlon水平。4.荧光PCR mix中含第二代饱和型荧光染料，效果好于SYBR Green I。5.密封体系，极大降低了假阳性。6.本产品跟各种荧光PCR仪器兼容。

牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)操作步骤：

1.样品处理（样本处理区）

1.1.样本前处理

1.2.DNA提取

2.试剂配制（试剂准备区）

3.加样（样本处理区）

4.PCR扩增（核酸扩增区）

5.结果分析判定

6.质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤30；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

7.产品性能指标

阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率为100％。

最低检测限：检测灵敏度可达100copies/uL以下。

精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于5%。

应用^[4][5]

牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)可以用于牛腺病毒3型和牛副流感病毒3型对实验动物致病性的研究

牛呼吸道传染病多表现为牛呼吸道疾病综合征，对养牛业危害严重。牛腺病毒3型与牛副流感病毒3型都是已知的牛呼吸道疾病综合征的重要病原。2009年国内首次报道从黑龙江的分离到一株BAV-3，命名为HLJ0955株。而在2008年本实验室从山东省牛群中首次在国内分离到4株BPIV3，为一新的基因型。由于牛群中BAV-3和BPIV3自然感染非常普遍，导致在进行实验感染时获取合适的实验用牛非常困难。因此，SPF实验动物也许是研究BAV-3和BPIV3致病性的有效动物模型。

本研究应用病毒分离、牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)和免疫组化检测BAV-3在实验感染BALB/c小鼠和豚鼠中的组织分布。通过滴鼻接毒（104.5TCID50）小鼠以及豚鼠（105.2TCID50），在接毒后不同时间采集肺脏等组织进行相关试验。

牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)结果表明BAV-3能够在2周龄小鼠肺脏中有效地复制。IHC结果表明在接毒后第1到第11天能够在肺脏内皮细胞检测到BAV-3抗原。荧光定量PCR能够在接毒小鼠第1到第7天的肺脏中检测到病毒DNA。BAV-3接毒小鼠会造成出血、肺泡内皮细胞增生等病理变化。而在接毒4周龄小鼠体内，肺脏病变程度较轻。所有接毒的豚鼠在接种后体温升高,剖检可见肺脏实变和出血；病毒分离和免疫组化在感染后24小时检测到病毒复制；牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)在感染后第1天到第11天的肺脏中检测到病毒DNA。病毒中和试验表明在接毒后第11天产生中和抗体。豚鼠病理组织学变化与小鼠变化相似。本研究还利用BPIV3SD0835株接毒16只豚鼠(3.55×106TCID50)。接毒豚鼠表现出呼吸道相关的临床症状，且有2只豚鼠死亡；解剖学可见肺脏暗红、实变。组织病理学变化包括肺泡间隔增宽和纤维素性肺炎。利用病毒分离滴定、牛腺病毒3型(BAV-3)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)和免疫组化在接毒24小时呼吸道组织中检测到了病毒复制。同时，IHC染色揭示了肺脏和气管是SD0835株主要复制的组织部位。在接毒后期能够检测到病毒特异性的中和抗体。

参考文献

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[5]史鸿飞.牛腺病毒3型和牛副流感病毒3型对实验动物致病性的研究[D].中国农业科学院,2014.