细胞低温冻存液

背景及概述^[1]

细胞低温冻存液又叫细胞冻存液。目前细胞的低温保存需要添加冷冻保护剂，如果直接冷冻细胞内会产生冰晶对细胞造成伤害从而导致细胞死亡。冷冻保护剂包括渗透性冷冻保护剂和非渗透性冷冻保护剂，其中，渗透性冷冻保护剂对细胞冻存起到重要的作用，包括二甲基亚砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇、丙醇、和甲酰胺等。

渗透型冷冻保护剂能够穿过细胞膜渗透到细胞内，其中最常用的就是DMSO，DMSO能够渗透到细胞内增大胞内渗透压，降低冰点，延缓冻存过程。但是DMSO对细胞存在一定的毒性，在一些临床治疗案例中，注射了含有DMSO的细胞的病人表现出恶心、头痛、高血压和腹部绞痛等症状。因此，对于临床治疗的细胞应该尽量减少DMSO的用量，或将其替换为一种更安全的冷冻保护剂。

目前已经有一些公司生产出不含DMSO成分的冻存液，例如，日本全药工业株式会社生产的GMP级无血清无DMSO的细胞冻存液，其冷冻保护剂为1，2--丙二醇，虽然毒性较低，但制造商研制过程中从未用它测试过治疗用的细胞类型。

专利EP2305792A公开的技术使用了不含动物源成分、不含DMSO的细胞冻存液，使用安全无毒的琥珀酰-ε-多聚赖氨酸作为冷冻保护剂替代有毒的DMSO，没有引入任何动物源性物质，减少了污染的几率。但是其所公开的细胞冻存液在长时间保存细胞时对细胞造成一定程度的损伤，细胞存活率有待进一步提高。

简介^[1]

CN201811072202.1提供一种细胞冻存液，实现细胞冻存液的安全无毒、进一步提高细胞存活率。本发明的所述细胞冻存液，包含酰基化ε-多聚赖氨酸、多元醇和平衡缓冲液。本发明所述细胞冻存液，其有益效果在于：所述细胞冻存液包含酰基化ε-多聚赖氨酸和多元醇，替代了有毒性的DMSO作为冷冻保护剂，稳定性好，无毒副作用，与已有的琥珀酰-ε-多聚赖氨酸冻存液相比，添加所述多元醇，能够进一步减小冻存复苏过程中对细胞的损伤，提高细胞存活率。

使用所述细胞冻存液进行细胞冻存复苏的方法，包含以下步骤：

S1:取待冻存细胞悬液，离心收集细胞，用所述细胞冻存液重悬细胞并调整细胞浓度，获得细胞悬液；

S2:吸取所述细胞悬液分装于冻存管或冻存袋中，然后将所述冻存管或冻存袋冻存；

S3:取出所述冻存管或冻存袋，在30-40℃的条件下对所述冻存管或冻存袋进行解冻处理，得到复苏后的细胞。

主要参考资料

[1] CN201811072202.1 细胞冻存液、冻存复苏方法及其应用