软骨素硫酸盐的药理活性研究

简述

软骨素硫酸盐又名硫酸软骨素（分子式：C₁₃H₂₁NO₁₆S，分子量为479.368），是从动物软骨中提取的硫酸软骨素A，和C等酸性粘多糖的混合物。该物质呈白色或淡黄色粉末状，无味，无臭，有吸湿性，易溶于水而呈粘度较大的溶液，不溶于乙醇，丙酮和乙醚等有机溶剂中，其盐类对热较稳定[1]。

以牛鼻软骨为原料，采用增大碱浓度提取，复合酶水解及浓缩后酒精沉淀的方法实现软骨素硫酸盐的生产，在最佳实验条件下，得到软骨素硫酸盐为白色粉末，其纯度达95.2%，收率为32.6%，可有效提高产品纯度和收率，值得推广应用[2]。

测定方法

间苯三酚分光光度法

利用含有间苯三酚的无机酸与样品中软骨素硫酸盐反应生成肯色产物进行分光光度分析。结果：100℃反应30min在波长558nm处测定软骨素硫酸盐，在0.10~1.0mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9993)，具有较好重现性。此法操作简便，结果准确[3]。

天青A分光光度法

利用软骨素硫酸盐与天青A作用后，其复合物溶液在625 nm处吸光值与软骨素硫酸盐浓度成线性关系的特点，建立一种测定中药复方样品中软骨素硫酸盐含量的快速，简便，灵敏的分光光度法。该方法在0～30 μg*mL^-1范围内呈现良好的线性关系(R=0.999)，回收率范围为97.4%～103.8%[4]。

药理活性研究

软骨素硫酸盐主要应用于关节炎、滴眼液等，具有止痛，促进软骨再生的功效，对改善老年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果，可以改善关节问题。此外，研究还发现，它可促进肿瘤细胞的增殖，抑制其转移。

为了观察软骨素硫酸盐对阿霉素作用下HL60细胞增殖分化的影响，设计开放性实验，方法如下：

①细胞传代培养后将进入对数增殖期的细胞用含体积分数0.1灭活胎牛血清的RPMI1640培养液配制成1×10⁸L^-1的细胞悬液，分装于45个培养瓶中，4mL/瓶。

②取分装好的细胞悬液15瓶，按照0，5，25，50，75mg/L浓度加入软骨素硫酸盐，每个浓度平行3瓶，空白对照组加入等量的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。采取细胞计数法测定软骨素硫酸盐处理后的HL60细胞密度的变化。

③取分装好的细胞悬液30瓶，分为软骨素硫酸盐+阿霉素组，软骨素硫酸盐组，各15瓶。按照0，5，25，50，75mg/L浓度向两组加入软骨素硫酸盐，每个浓度平行3瓶，空白对照组加入等量的0.01mmol/L磷酸盐缓冲液。用MTT法测定软骨素硫酸盐处理后的HL60细胞加入阿霉素后细胞存活率的变化。

④取分装好的细胞悬液15瓶，按照0，5，25，50，75mg/L浓度加入软骨素硫酸盐，每个浓度平行3瓶，空白对照组加入等量的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。用酶联免疫反应测定各组细胞的酸性磷酸酶活性，观察其对细胞分化的影响。

主要观察指标：①软骨素硫酸盐对HL60细胞增殖的影响；②软骨素硫酸盐+阿霉素对HL60细胞存活率的影响；③软骨素硫酸盐对HL60细胞酸性磷酸酶活性的影响。

结果：①与空白对照组比较，不同浓度软骨素硫酸盐处理24h后HL60细胞密度均显著升高(P0.01)；且50，75mg/L软骨素硫酸盐浓度组的细胞密度升高尤为明显，但两组间比较基本相似(P0.05)，说明在这个浓度范围内硫酸软骨素对细胞生长的促进作用变化不大。②与空白对照组比较，加入不同浓度软骨素硫酸盐后，软骨素硫酸盐+阿霉素组细胞存活率均有不同程度的降低，软骨素硫酸盐浓度超过25mg/L时降低明显(P0.01)。③与空白对照组比较，5，25，50mg/L软骨素硫酸盐浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值均明显升高(1.268±0.038，1.305±0.101，1.321±0.021，1.354±0.013，P0.01或0.05)，尤其是75mg/L软骨素硫酸盐浓度组HL60细胞酸性磷酸酶吸光度值高达1.406±0.113，与空白对照组比较差异有极显著意义(P0.001)。

故可得出结论，软骨素硫酸盐在适当浓度时对HL60细胞的增殖产生促进作用，可提高HL60细胞对阿霉素的敏感性，促进细胞分化[5]。

参考文献

[1]张良才.硫酸软骨素含量测定乙二胺四乙酸二钠盐络和法[J].中国生化药物杂志, 1982(04):28-30.DOI:CNKI:SUN:SHYW.0. 1982-04- 007.

[2]高华,刘坤,于兹东,等.硫酸软骨素生产新工艺研究[J].青岛大学学报：工程技术版, 2003, 18(4):4.DOI:10.3969/j.issn.1006-9798.2003.04.013.

[3]高华,刘坤,于兹东,等.间苯三酚分光光度法测定硫酸软骨素的研究[J].中国生化药物杂志, 2000, 21(5):2.DOI:10.3969/j.issn.1005-1678.2000.05.012.

[4]高贵珍,焦庆才,丁一磊,等.天青A分光光度法测定硫酸软骨素含量的研究[J].光谱学与光谱分析, 2003, 23(3):600-602.DOI:10.3321/j.issn:1000-0593.2003.03.051.

[5]徐文华,虞浩,张银亭,et al.硫酸软骨素对HL60细胞增殖分化的影响[J].中国临床康复, 2006, 10(37):166-168.DOI:10.3321/j.issn:1673-8225.2006.37.039.