亮绿SF染色液(1%)的应用

背景^[1-3]

亮绿SF染色液(1%)别称是酸性绿5，Light green SF yellowish，是一种化学品，又称亮绿SF（淡黄）、亮绿2G、亮绿S、酸性绿等，分子式C37H34N2Na2O9S3，分子量为792.84，易溶于水呈绿色溶液。亮绿SF染色液(1%)属于浆质染色剂可用于动物组织染色或与铁苏木素或其他核染料作对比染色。在植物组织学中作细胞质和纤维染色和酸性品红共染花粉管。亮绿SF染色液(1%)主要由亮绿SF、磷酸盐、去离子水等组成，根据不同组织染色而异。

亮绿SF水中溶解度:200 g/l(20°C)，溶于醇用作细胞学上的复染色，或Gomori's步骤中用作苯胺兰的替代物。

浅绿色三苯甲烷(LGSFY)是酸性三苯甲烷染料的二钠盐。它还称为浅绿、丽丝胺绿SF、食品绿2、绿色205号、酸性绿、酸性亮绿5、酸性亮绿SF。除伊红Y和bismark brown Y外，LGSFY是巴氏染色的重要成分。浅绿色SF淡黄色是胶原蛋白的组织学染色剂，也是食品和饮料允许使用的着色剂。

亮绿SF染色液(1%)通常用作核染色的细胞质复染色，如番红和富尔根染液。在组织病理学中，用于胶原纤维马森三色染色、巴氏染色细胞学多色染色和组织切片微生物的特沃特染色。它是用于分化垂体分泌细胞的多色染色法的组成部分。浅绿色SF也能对植物细胞的纤维素细胞壁染色。

使用方法：按实验具体要求操作。一般染色1～3min，根据不同组织染色而异。

亮绿SF染色液(1%)

亮绿SF染色液(1%)优点：

颜色鲜明：亮绿SF染色液染色后绿色明显，在显微镜下可更清楚地识别细胞结构或组织成分。

专一性强：对某些组织成分，如胶原纤维，有较好的特异性，因此在特定场景下的组织染色效果突出。

方便使用：操作程序简单，染色时间较短。

稳定性好：室温避光保存，有效期12个月。

应用^[4][5]

亮绿SF染色液(1%)可以用于CsA对大鼠脑缺血再灌注损伤OX-42、iNOS表达的影响及对髓鞘的保护作用研究

通过采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,用CsA作为干预药物治疗,采用免疫组化SP染色技术,动态观察脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区OX-42、iNOS以及胼胝体区髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达情况,变色酸2R-亮绿SF（亮绿SF染色液(1%)）双重染色法髓鞘染色,观察急性脑缺血再灌注损伤后髓鞘的变化,及CsA的干预作用,并对大鼠神经行为学进行评分,为探索脑缺血的神经保护剂的应用,提供理论依据和新的思路。

材料与方法1.实验动物分组及给药方法成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,随机分为3组,假手术组、模型组和环孢素A组,每组24只,每组分为4个亚组。环孢素A组手术后每天腹腔注射环孢素A(20mg/kg),模型组和假手术组每日腹腔注射等体积的生理盐水2模型制作和入选标准采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。模型组和环孢素A组缺血2小时进行再灌注,假手术组仅分离颈总动脉。动物麻醉苏醒后,参照Zea-longa等评分标准,1-3分为入选对象。3脑组织切片的制备大鼠心脏灌注后断头取脑后,常规固定、脱水、石蜡包埋。制成4μm和6μm的切片,分别用于免疫组化染色和变色酸2R-亮绿SF（亮绿SF染色液(1%)）双重染色法髓鞘染色。4检测指标(1)参照Zea-longa等评分标准,对大鼠神经行为学进行评分；(2)髓鞘染色,光学显微镜下观察髓鞘变化；(3)采用SP法进行免疫组化染色,观察大鼠海马CA1区OX-42、iNOS以及胼胝体区MBP的表达。5图像分析每个标本随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400),测定每个视野下的阳性区平均灰度值,以5个视野的平均灰度值的平均值作为该例的测量值。应用图象分析系统进行检测。6统计学方法采用SPSS12.0统计软件处理,实验数据用均数±标准差(x±S)表示,采用单因素方差分析,组间比较采用LSD检验,α=0.05为显著性检验性水准。

结果1实验动物一般情况及神经行为学评分假手术组：无神经系统功能缺陷,动作敏捷,反应灵敏,自由食水；模型组：精神萎靡,食欲不振,自主活动少,不同程度出现左侧霍纳氏征,追尾征以及强迫姿势；环孢素A组较模型组情况改善,且神经行为学评分优于模型组,差异有统计学意义。2变色酸2R-亮绿SF（亮绿SF染色液(1%)）双重染色法髓鞘染色结果显示,假手术组髓鞘染色的切面红绿相间,类似鱼骨刺状,排列紧密,髓鞘为红色,轴索呈绿色。模型组1d、3d与假手术组相比无明显差异,7d、14d胼胝体髓鞘染色疏松、空泡形成,髓鞘密度明显降低。环孢素A组7d、14d胼胝体髓鞘密度较假手术组也明显降低,但好于模型组。

参考文献

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[2]Nimodipine can improve cerebral metabolism and outcome in patients with severe head trauma[J].Adem Aslan;;Mustafa Gurelik;;Mustafa Cemek;;Hakan Murat Goksel;;Mehmet Emin Buyukokuroglu.Pharmacological Research,2008(2)

[3]T-and B-Cell-Deficient Mice with Experimental Stroke have Reduced Lesion Size and Inflammation[J].Patricia D Hum;;Sandhya Subramanian;;Susan M Parker;;Michael E Afentoulis;;Laurie J Kaler;;Arthur A Vandenbark;;Halina Offner.Journal of Cerebral Blood Flow&Metabolism.2007

[4]Calcineurin-independent inhibition of the delayed rectifier K+current by the immunosuppressant FK506 in rat hippocampal neurons[J].Yong Yu;;Xue-Qin Chen;;Yao-Yuan Cui;;Guo-Yuan Hu.Brain Research,2007

[5]杜家琇.CsA对大鼠脑缺血再灌注损伤OX-42、iNOS表达的影响及对髓鞘的保护作用研究[D].郑州大学,2011.