EHRLICH苏木素染色液的应用

背景^[1-3]

EHRLICH苏木素染色液为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素成熟的方法有自然氧化法、化学氧化法。自然氧化是指暴露于光和空气中，这个过程比较缓慢，约需3～6个月不等，但生成物染色能力可维持很长时间。Ehrlich和Delafield苏木素就属于这种。EHRLICH苏木素染色液作为一种良好的核染色液，也可用于黏蛋白染色如软骨的黏液多糖，骨和软骨的染色也推荐使用EHRLICH苏木素染色液。

EHRLICH苏木素染色液非常稳定，成熟后密封可保存2年。对核染色质染得很清晰细致，染色时间也稍长，约15～20min。用此染色液对冷冻切片染色则不理想。

EHRLICH苏木素

自备材料：

1.酸性乙醇分化液

2.蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等

3.系列乙醇

4.伊红染色液

5.4%多聚甲醛

使用说明：

(一)石蜡切片染色

1.切片脱蜡至水

2.染色

a.改良Lillie-Mayer苏木素染色液染色5～8min

b.自来水或蒸馏水冲洗5～10s

c.(可选)盐酸乙醇分化2～5s

d.自来水冲洗20～30s

e.(可选)蓝化液返蓝20～40s

f.自来水冲洗30～60s

g.伊红染色液染色3～5min

h.自来水冲洗1～5s

3.脱水、透明、中性树脂封片。

(二)冰冻切片染色

1.乙醚-乙醇混合固定液5～10s

2.自来水冲洗2～5s

3.改良Lillie-Mayer苏木素染色液滴染1～2min(可加热至50℃)。

4.自来水冲洗2～5s

5.(可选)盐酸乙醇分化2～5s

6.自来水冲洗2～5s

7.(可选)蓝化液返蓝2～5s

8.自来水冲洗5～10s

9.伊红染色液染色2～5s

10.自来水冲洗1～2s

11.常规脱水、透明、中性树脂封片

(三)细胞染色

1.4%多聚甲醛固定10～20min。

2.自来水冲洗2次，每次2min。

3.蒸馏水冲洗2次，每次2min。

4.染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

注意事项：

1.切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。

2.盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。

3.蓝化液常使用0.2～1%氨水或Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂溶液。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用^[4][5]

EHRLICH苏木素染色液可以用于阴道镜及显微镜下苏木素染色对宫颈病变早期诊断价值的研究

通过分析宫颈鳞状上皮EHRLICH苏木素染色液染色后直接冰冻切片病理检查结果和HE染色石蜡切片病理结果，了解宫颈鳞状上皮苏木素富染区(称之染色阳性)是否能预知病理结果。通过分析CIN组中符合中医带下病诊断的病例之不同证型，了解CIN与中医带下病各证型之间的关系。

方法：收集73例行阴道镜检查的病例，将其分为两组，一组为宫颈鳞状上皮苏木素染色(±)的病人；另一组为宫颈鳞状上皮EHRLICH苏木素染色液染色(+)病人，活检宫颈苏木素富染区组织。将宫颈苏木素富染区组织活检送病理做快速冰冻切片(不再作任何染色处理)，直接镜下观察富染区细胞核染色情况，再将其余组织用10％甲醛固定，石蜡包埋，切片后作HE染色检查。

结果：60例CIN和炎症患者，宫颈鳞状上皮苏木素染色后直接冰冻切片与HE石蜡切片病理结果对比，两者无统计学差异(p=0.833)，说明EHRLICH苏木素染色液染色后苏木素富染区能预知病理结果。在总共46例CIN及宫颈癌患者中，有31例符合中医带下病的诊断，占CIN的67.4％，其中肾虚型6例(占19.4％)，脾虚型5例(占16.1％)，湿热型19例(占61.3％)，湿毒型1例(占3.2％)。故CIN的带下病患者中，湿热型是最主要的证型。结论：阴道镜下宫颈苏木素染色可行，阴道镜检查宫颈鳞状上皮EHRLICH苏木素染色液富染结果和脱落细胞学结合的检查方法，可预知病理检查结果。在CIN的带下病患者中，湿热型是最主要的证型，CIN中的带下病是以湿热为其主要病因。

参考文献

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[2]Carcinogenicity of Human Papillomavirus(HPV)Types in HIV-Positive Women:A Meta-Analysis From HPV Infection to Cervical Cancer.[J].Clifford Gary M;;Tully Stephen;;Franceschi Silvia.Clinical infectious diseases:an official publication of the Infectious Diseases Society of America.2017

[3]Cancer statistics in China,2015.[J].Chen Wanqing;;Zheng Rongshou;;Baade Peter D;;Zhang Siwei;;Zeng Hongmei;;Bray Freddie;;Jemal Ahmedin;;Yu Xue Qin;;He Jie.CA:a cancer journal for clinicians.2016

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[5]严燕.阴道镜及显微镜下苏木素染色对宫颈病变早期诊断价值的研究[D].南京中医药大学,2006.