结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA)的应用

背景^[1-3]

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)是一种固体鉴别培养基，主要用于大肠菌群的固体平板检测。

成分(g/L)：蛋白胨7.0，酵母浸粉3.0，氯化钠5.0，乳糖10.0，胆盐1.5，结晶紫0.002，中性红0.03，琼脂15.0，pH值7.4±0.1。

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)用法：

称取结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)干粉41.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸不要超过2分钟。取适宜稀释度样品液1ml，加入到无菌平皿中心，将冷至45-50℃的VRBA 10-15ml倾注于平皿中。小心旋转平皿将培养基与样液充分混匀。凝固后，再加3-4ml VRBA覆盖平板表层，翻转平板，置于36±1℃培养18-24小时。无需高压灭菌。临用时制备，不得超过3小时。

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)检验原理：

蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、维生素、生长因子和辅酶等其他营养物质；氯化钠维持均衡的渗透；乳糖为可发酵碳水化合物，可作为一种能量来源；结晶紫对革兰氏阳性菌如葡萄球菌、白喉杆菌，以及绿脓杆菌、白念珠菌、表皮癣菌有杀灭作用，对其他革兰氏阴性菌和抗酸菌几乎无作用；中性红为指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)外观：

干粉培养基为淡红色粉末。

制备好的培养基为紫红色透明固态。

使用结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)的注意事项：

本品仅限于实验室使用。

干粉培养基出现过期、结块或变色，请勿使用。

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)保存条件和保质期：

干粉培养基在5-30°C下干燥避光保存，其保质期为三年。

制备好的培养基须在2-8°C干燥避光保存。

应用^[4][5]

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)可以用于食品中大肠菌群检测方法与指标值对应关系的研究

国家标准规定食品中大肠菌群检测方法为：GB/T 4789.3-2003(一种方法,简称2003版方法,单位:MPN/100g(mL))与GB 4789.3-2010(第一法：大肠菌群MPN计数法,简称2010版MPN计数法,单位:MPN/g(mL);第二法：使用结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)的大肠菌群平板计数法,简称VRBA法,单位：CFU/g(mL))。目前,产品标准中大肠菌群指标值大多数是根据2003版方法制定,因缺乏与2010版相对应的指标值,许多企业及检验机构在检测时对方法选取及指标值判断易产生混乱造成漏检。因此,本论文对2010版大肠菌群检测方法与产品标准中大肠菌群指标值的对应关系进行了研究。

本研究首先通过标准菌株试验及样品验证对比,分析了2003版方法与2010版MPN计数法的灵敏度及区别,并对其差异原因进行分析；其次对2010版两种检测方法的灵敏度、适用性进行分析,最后对酱腌菜、冰淇淋、糕点、肉制品中大肠菌群检测方法与产品标准指标值的对应关系进行了研究,建立了与2010版MPN计数法相对应的4大类食品中大肠菌群指标值。同时,对4大类食品设置指标值的大小及适用不同检测方法的原因进行了探讨。

主要研究内容和结论如下：(1)通过标准菌株及50份样品验证,对2003版方法与2010版MPN计数法进行对比研究,结果表明2003版方法灵敏度较低,原因在于2010版初发酵培养基中月桂基硫酸钠代替了2003版初发酵培养基中的胆盐,且月桂基硫酸钠对大肠菌群有修复作用。(2)通过标准菌株对结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)VRBA法与平板计数法进行对比研究,检测结果分别为：3.9×106MPN/g(mL)、4.7×106MPN/g(mL),证实结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)VRBA法在大肠杆菌检测中有较好灵敏度。用2010版MPN计数法与VRBA法对120份样品进行检测,不合格率分别为：10.8%、12.5%,差异较小,且VRBA法有较好灵敏度。但MPN计数法为最大概率值,结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)VRBA法为准确定量值,建议国家在要求比较严格的食品种类,例如婴幼儿及老年食品中采取VRBA法检测,且对相应指标值进行修改。

参考文献

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[5]刘耕典.食品中大肠菌群检测方法与指标值对应关系的研究[D].陕西科技大学,2016.