原花青素 B2的提取及其稳定性

原花青素是植物中广泛存在的一类天然多酚类化合物的总称。主要由儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯聚合而成，具有良好的抗氧化活性。已被广泛运用在保健品、食品、化妆品等领域。原花青素B2是由2个表儿茶素聚合而成的二聚体，有研究表明，它是原花青素中抗氧化活性最强的单体，可作为衡量原花青素质量的标志性成分。目前，原花青素的提取分离主要集中在葡萄籽中。而从油茶籽壳中提取分离原花青素B2，还未见相关报道。

提取方法

采用自有技术制备高纯度原花青素B2。将油茶籽壳粉碎至60um过筛，在温度67C、提取时间109min、体积分数65%乙醇、液料比19:1(mL/g)的条件下进行提取，提取浓缩后得到粗提液。

利用分子印迹技术对粗提液中的原花青素B2进行定向分离。将模板分子原花青素B2、硝酸铝、2-乙烯基吡啶(摩尔比为1:3:8)加入溶剂中，超声振荡2h，使Al³⁺和原花青素B2充分配位。往溶液中加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)和引发剂偶氮二环已基甲腈(ACCN)，超声振荡20min，充氮10min后真空密封，于60℃恒温水浴热引发聚合24h，得到印迹聚合物。聚合物烘干后研磨粉碎至75um过筛，于甲醇溶液中反复清洗除去过细颗粒。将得到的聚合物在索氏提取器中用乙酸和甲醇(体积比为9:1)混合溶液抽提，洗脱模板分子原花青素B2直至回流液高效液相色谱在波长280nm处检测不到为止；然后用4mmol/L EDTA溶液洗涤除去残留在聚合物中的Al³⁺，最后用水和甲醇重复洗涤至pH中性，放入真空干燥箱中干燥，得到原花青素B2-Al(III)分子印迹聚合物。将制得的原花青素B2-Al(III)分子印迹聚合物装入固相萃取柱，加入甲醇溶液淋湿，并将原花青素粗提液上柱，吸附完毕后采用乙酸和甲醇(体积比为9:1)混合溶液洗脱，经浓缩、干燥后得到原花青素B2产品，经HPLC检测原花青素B2质量分数为97.2%。

检测条件

采用RP-HPLC法检测原花青素B2含量，具体条件：色谱柱Hypersil ODS2；流动相，甲醇:水:冰醋酸体积比95:3:2，梯度洗脱；流速，1mL/min；检测波长，280nm；柱温，35℃；进样量，20uL。

稳定性

光照会在一定程度上影响原花青素B2的稳定性，尤其是紫外光条件下稳定性急剧变差，原花青素B2在保存过程中应注意避光；不同pH对原花青素B2的影响具有明显的差别，在酸性条件下稳定性明显比在碱性条件下好，原花青素B2宜在酸性条件下保存；原花青素B2对温度具有一定的敏感性，低温情况下变化不大，在55℃以上稳定性变差，在70℃以上稳定性急剧变差，原花青素B2应储藏在40℃以下为宜；金属离子的存在对原花青素B2稳定性都有一定程度的影响，在保存过程中应该避免接触金属离子，尤其是Cu²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺；柠檬酸和维生素C能在一定程度增强原花青素B2的稳定性，而山梨酸钾和亚硫酸钠则会降低原花青素B2的稳定性，建议保存过程中添加质量分数0.2%的柠檬酸或维生素C。

参考文献

[1]熊伟,付建平,韩晓丹,等. 油茶籽壳中原花青素B2稳定性的研究[J]. 粮食与油脂,2021,34(12):142-144,149. DOI:10.3969/j.issn.1008-9578.2021.12.033.