葡萄籽中原花青素B2的分离纯化

背景技术

原花青素(Oligomeric proanthocyanidins, OPC) 是一种有着特殊分子结构的多酚类化合物，具有多种生理活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、保护心血管、降血糖、降血压、降血脂及美容护肤等。有研究表明， 葡萄籽原花青素B2是活性最强的低聚体原花青素，可作为衡量原花青素质量的标志性成分。目前，原花青素B2已广泛应用于食品、保健品和化妆品等领域，其性状如下图1。 

目前市场上原花青素B2产品纯度参差不齐，未按照相关标准进行均匀性、稳定性和定值试验，国内尚没有该化合物的标准样品。严重限制了相关产品中原花青素B2的准确定量及相关的品质分析、质量评价等方面的研究。因此，为了提高原花青素B2分析测定的准确度和质量评价的一致性等，开展原花青素B2标准样品的研究具有十分重要的意义。

分离纯化

称取2kg葡萄籽，经超声辅助法提取，50%乙醇为提取溶剂，料料液比1∶10，重复提取2次，减压浓缩得到粗体物浸膏。称取葡萄籽粗体物浸膏200mg，进一步采用高速逆流色谱（High-speed Countercurrent  Chromatography，HSCCC）法和制备液相色谱法分离纯化得到原花青素B2标准样品候选物。HSCCC溶剂体系为正丁醇-乙酸乙酯-水（1∶14∶15，V/V），流速2.0mL/min；分离温度25℃，检测波长280nm。半制备型色谱柱XBridge Prep-C18（10mm×150mm,  5μm）；流动相A为乙腈，B为0.1%甲酸，0~90min 5%A；流速3mL/min；柱温25℃；检测波长274nm。

原花青素B2制备过程中，根据HSCCC图收集目标化合物峰II（图2），浓缩得到高纯度粗提物，该粗提物再进一步采用制备液相色谱法分离纯化，将收集的目标馏分（图3）合并，浓缩得到原花青素B2标准样品候选物。

参考文献

[1] 徐双双,贺天雨,黄雯雯,等. 葡萄籽中原花青素B2分离纯化及其标准样品定值研究[J]. 分析仪器,2023(3):74-79.