蛋白质免疫印迹膜再生液的使用方法

发布日期:2024/10/12 14:34:59

自1979年推出以来，蛋白质印迹（WB）成为一种简单而廉价的技术。目前，WB 被广泛应用于蛋白质的检测和半定量及其表达水平的研究。在实际应用中，我们经常反复剥离和再检测，以检测印迹膜上的不同蛋白质来节省时间和金钱。然而，每一轮剥离会去除一些转移到印迹膜上面蛋白，影响实验结果。本文将介绍一种蛋白质免疫印迹膜再生液的使用方法^[1]。

蛋白质免疫印迹流程

步骤（1）：采用蛋白质免疫印迹膜，利用辣根过氧化物酶、化学发光试剂，进行蛋白质免疫印迹检测；

步骤（2）：洗去步骤（1）已使用的蛋白质免疫印迹膜上的化学发光试剂；

步骤（3）：将步骤（2）洗去化学发光试剂的蛋白质免疫印迹膜加入到权利要求1-3任一项所述的蛋白质免疫印迹膜再生液中进行震荡孵育；

步骤（4）：取出步骤（2）中的膜，用双蒸水和/或TBST溶液洗涤，得到辣根过氧化物酶已经失活的膜;

步骤（5）：采用步骤（4）得到辣根过氧化物酶已经失活的膜，利用辣根过氧化物酶、化学发光试剂，进行蛋白质免疫印迹检测。

作为优选，步骤（5）中所检测的蛋白质与步骤（1）所检测的蛋白质为非同种蛋白质。

作为优选，步骤（1）-步骤（4）重复循环至少两次，在后所检测的蛋白与在先所检测的蛋白均为非同种蛋白。

所述蛋白质免疫印迹膜再生液的配方中包括巴豆酸，所述巴豆酸的浓度为5-20%质量比，通过巴豆酸灭活二抗标记的辣根过氧化物酶(HRP)来实现蛋白质免疫印迹膜的再次使用，所述再生液及蛋白质免疫印迹膜再生液的使用方法不影响抗体与印迹上的抗原之间的结合以及印迹膜上抗原含量的变化，并可以重复使用，并且在NC膜的处理中具有独特优势：使用CA 预先孵育不仅可以稳定 NC 膜结合蛋白质，而且可以提高 NC 膜检测的灵敏度。