钙黄绿素是什么？它的工作原理你了解吗？

钙黄绿素是一种钙依赖型荧光分子。它主要用于研究体内条件下的骨代谢，并有助于在体外条件下对凹陷区域进行染色。钙黄绿素被用于钙的荧光测定以及钙的EDTA（乙二胺四乙酸）滴定。钙黄绿素通常用乙酰氧基甲基酯（例如钙黄绿素 AM）进行修饰以促进膜通透性，并广泛用作检测活细胞的活力指示剂。它与几种药物相关的测定有关，包括细胞毒性、氧化功能和神经毒性。

钙黄绿素,AM如何工作？

钙黄绿素 AM 是钙黄绿素的乙酰甲氧基衍生物，是一种可透过膜的荧光酯酶底物，用于测定细胞活力和膜完整性。钙黄绿素 AM 的亲脂性使其能够自由扩散穿过细胞膜并渗透到活细胞的胞质溶胶中。进入细胞后，非特异性细胞内酯酶会酶促去除 AM 基团，由此产生的去酯化钙黄绿素产物会被困在细胞内。在蓝光激发下，钙黄绿素在 521 nm 处发出明亮的绿色荧光。钙黄绿素的荧光强度与细胞酯酶的活性和样品中存在的活细胞数量成正比。

钙黄绿素,AM 有毒吗？

钙黄绿素AM的SDS表明它是一种无害物质或混合物。在生命科学和药物发现研究中，钙黄绿素AM由于其相对较低的细胞毒性，通常用于研究酶活性、细胞活力、膜完整性和长期细胞追踪。然而，对于特定的细胞系和实验条件，高浓度的钙黄绿素AM已被证明对细胞具有毒性。

钙黄绿素AM是荧光的吗？

不，钙黄绿素 AM 是一种非荧光酯酶底物。然而，在活细胞中，钙黄绿素 AM 可以被动地穿过细胞膜并进入胞质溶胶，从而使非特异性细胞内酯酶水解来自钙黄绿素 AM 的乙酰氧基甲酯，从而产生高荧光钙黄绿素产物。钙黄绿素分别在 501 nm 和 521 nm 处具有激发和发射峰，并在激发时产生强烈的绿色荧光。测得的信号强度与起作用的细胞酯酶的活性和存在的活细胞数量成正比。

钙黄绿素AM在染色后可以固定吗？

不能，无论使用何种固定方法 - 醛或甲醇固定 - 用钙黄绿素 AM 染色的细胞都会失去其染色效果。此外，钙黄绿素 AM 不能用于固定细胞，因为它们缺乏将钙黄绿素 AM 转化为钙黄绿素所需的酯酶以及保留染料所需的膜完整性。钙黄绿素 AM 是一种荧光酯酶底物，只能用于活细胞以确定细胞活力。如需此类实验，请千万注意！