HPLC法测定重酒石酸去甲肾上腺素

简介

重酒石酸去甲肾上腺素(NE-B)为白色结晶性粉末，易溶于水，微溶于乙醇，在氯仿或乙醚中不溶。重酒石酸去甲肾上腺素属于肾上腺素能α、β-受体激动药，尤以α-受体作用为主。与肾上腺素相比，其收缩血管与升压作用较强，并反射性地引起心率减慢，但兴奋心脏，扩张支气管作用较弱，主要用于抗休克。 临床上主要利用它的升压作用，以保证对脑等重要器官的血液供应。

背景技术

目前报道的测定去甲肾上腺素的方法有荧光法、毛细管电泳法、电致化学发光法，高效液相色谱法。高效液相色谱法多用电化学检测器和荧光检测器，而与化学发光检测器联用技术只见一篇报道。近年来，联用技术的探索一直是分析领域的研究热点，而高效液相色谱与化学发光的联用更是一个亮点。研究发现铁氰化钾在碱性条件下(NaHCO₃-NaOH缓冲溶液,pH=9.8)能够氧化鲁米诺产生化学发光，重酒石酸去甲肾上腺素存在可以大大增强其发光强度。基于此，结合高效液相色谱分离技术，在C18反相键合色谱柱上，流动相为邻苯二甲酸氢钾(0.01molL)：甲醇等于92:8(体积比)，pH值等于4.5的条件下，实现了对人体血清的重酒石酸去甲肾上腺素分离与测定。本方法流路简单，不需程序梯度洗脱，不需柱前衍生，不需外加光源，从而消除了散射光对测定的影响，大大提高了灵敏度和准确度。

检测方法

1、仪器和试剂

D-7000型高效液相色谱仪(日立公司);HL-2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂);MCFL-A型多功能化学发光/生物发光分析系统(西安瑞迈电子科技有限公司);微超滤管(VIVASPIN 100uL)。

重酒石酸去甲肾上腺素(中国药品生物制品检定所)配成浓度为1.0x10^-4g/mL的储备液；0.01mol/L Luminol储备液；K₃Fe(CN)₆(成都化学试剂厂)配成1.0x10^-2mol/L储备液；0.01mo/L邻苯二甲酸氢钾(上海试剂三厂)储备液；甲醇(天津四友生物技术有限公司)；血清样品由辽宁省沈阳市沈北新区中心医院化验室提供，其余试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

2、实验方法

分别将流动相和K₃Fe(CN)₆溶液、Luminol溶液(NaHCO₃-NaOH配制,pH=9.8)通过相应的管道输入分析系统，待基线稳定后，通过高效液相色谱进样阀(20uL)进样，记录重酒石酸去甲肾上腺素反应的发光信号，以相对峰高定量。

参考文献

[1] 张迎春,张迎雪,徐德泉. 高效液相色谱化学发光法测定人体血清中的重酒石酸去甲肾上腺素[J]. 海南师范大学学报（自然科学版）,2008,21(2):176-179. DOI:10.3969/j.issn.1674-4942.2008.02.016.