辐照型血清

背景^[1-5]

辐照型血清是将正常血清经过三次无菌过滤后再用钴-60辐射灭菌制得的血清。

辐照血清是细胞培养中最重要的天然培养基也是医药生物技术产品中重要的原材料之一,它具有促进细胞增殖和诱导细胞分化等的生物学功能其质量的好坏直接影响着生物制品的安全性。

同时血清也是微生物生长繁殖的良好营养物.易被病毒等外源因子污染而影响其质量,为生物技术产品的安全性留下了隐患.因此.研究如何控制血清中的病毒等外源因子的问题已成为保证生物技术产品安全性的首要问题.国外一些血清生产企业采用40 nm双重过滤.但仍不能保证病毒等外源因子完全除去：

有资料报道co-60射线照射可以有效灭活血清中可能污染的病毒、噬菌体.支原体等国内外大量-次性使用的医用制品都已经采用辐照灭菌,各种SPF动物的饲料使用辐照灭菌后,不但其成分不被破坏.而且使用安全保存期长，利用射线照射来保藏和消毒灭菌人用食品的研究,国内外报道很多.且国际FAO LAEA WHO组织已审议批准了部分辐照食品的使用。

辐照灭菌动物血清功能:

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

辐照灭菌血清用法：血清由冰冻状态在常温下完全融化成液体，摇均匀后放置10-30分钟待结块蛋白质沉底后即可使用。

注意事项：有少量蛋白质结块析出不影响使用。未融化或融化未经摇匀的血清禁止直接放入高温水浴内加温。减少血清重复冻融。血清在室温或4℃冰箱内放置过久会影响促细胞生长效果。

应用^[6-8]

辐照型血清可用于研究细胞培养及其分化：

在60Coγ-射线辐照新生牛血清对BHK21培养细胞的影响实验中用20kGyγ-射线辐照NBCS后培养BHK21细胞,通过连续传代培养和低密度生长曲线比较辐照前后的细胞生长效果。结果:NBCS辐照后连续传代培养10代,每代细胞生长良好,48 h内形成致密单层,与辐照前没有明显区别。NBCS辐照前后低密度培养BHK21细胞第5代平均增殖密度为51.35×104/ml、51.20×104/ml、倍增时间21.89 h、22.59 h;第10代为52.25×104/ml、52.73×104/ml和21.95 h、21.62 h,生长曲线基本一致。

结论:NBCS 20kGyγ-射线辐照后不影响BHK21细胞的培养效果。但用20 k Gy60Coγ-射线辐照NBCS后,培养Vero和CHO-K1细胞,通过连续传代培养及绘制低密度生长曲线,比较辐照前后的促细胞生长效果。结果Vero细胞的传代培养结果与未辐照前接近,生长曲线峰值略低于未辐照组,辐照前后细胞的增殖密度为73.38×104和65.33×104个/ml（P>0.05）,倍增时间为24.38和25.33 h（P>0.05）;CHOK1细胞传代培养无未辐照组致密,生长曲线较未辐照组平缓,辐照前后细胞的增殖密度为80.03×104和79.3×104个/ml（P>0.05）,倍增时间为19.73和23.62 h（P<0.05）。结论NBCS经20 k Gy 60Coγ-射线辐照后,对Vero细胞影响不明显,使CHO-K1细胞生长速度变慢。

参考文献

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[2]Animal cell culture:a practical approach.FRESHNEY R I..2010

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[7]乔自林,马桂兰,王家敏,李明生,冯若飞,令世鑫,马忠仁.~(60)Coγ-射线辐照新生牛血清对细胞培养的影响[J].中国生物制品学杂志,2017,30(05):481-484.

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