驴血清的应用

背景^[1-6]

驴血清采用成年健康驴血液为原料加工而成，经无菌采集、分离、微孔过滤分装而成。无支原体、无噬菌体，内毒素含量低于50EU/ml。

驴血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。

这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。驴血清是细胞培养中用量*的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。起酸碱度缓冲液作用。提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。驴血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。

主要是：血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难；第二血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制；第三不能排除血清中含有易变物质，这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。

驴血清瓶装血清解冻需采用逐步解冻，先在冰箱中溶解后移入室温待全部溶解后再分装在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀小心勿造成气泡使温度与成分均一减少沉淀的发生切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻这样因温度改变太大容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

应用^[7][8]

驴血清可用于研究驴血清白蛋白的提取及生物活性研究：

在源于驴血清白蛋白的肽HP-6对造血系统的体内外作用研究中分离培养人骨髓有核细胞(human bone marrow nucleated cells,hBMNCs)及小鼠骨髓基质细胞(murinebone marrow stromal cells,mBMSCs),通过与不同浓度肽HP-6(0.000 15,0.001 5,0.015,0.15,1.5μmol.L-1)共培养一定时间考察肽HP-6对骨髓造血相关细胞的促增殖能力,并通过电镜观察作用后的细胞形态;建立失血性贫血与环磷酰胺致贫血2种贫血动物模型,随机分组并灌胃不同剂量(1,0.1,0.01 mg.kg-1)肽HP-6,同时设立相应的对照组灌胃等体积PBS,7 d后检测贫血动物外周血象,对环磷酰胺致贫血小鼠加测骨髓细胞(bone marrow cells,BMCs)数。

结果:肽HP-6可刺激人骨髓有核细胞和小鼠骨髓基质细胞增殖且具有浓度相关性,0.15μmol.L-1肽HP-6使2种细胞均达到增殖率,分别为152.11%,63.52%,之后呈降低趋势;电镜结果显示与肽HP-6作用后的细胞微观形态结构正常;灌胃1 mg.kg-1肽HP-6对提高外周血血小板数量及保护环磷酰胺损伤的小鼠骨髓具有一定的功效;灌胃0.1 mg.kg-1肽HP-6对提高外周血白细胞及红细胞数量有较好的效果,还可对化疗药物作用后小鼠的外周血起到一定的保护作用;灌胃0.01 mg.kg-1肽HP-6对提高外周血血小板数量具有极佳的效果,相对增殖率可达77.65%。结论:肽HP-6可刺激造血系统相关细胞增殖,对小鼠造血功能与抵抗化疗药物损伤有一定的增强作用。

参考文献

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