鸡血清的应用

背景^[1-7]

鸡血清采用健康鸡血液为原料，经无菌采集、分离、微孔过滤后而成，性状为澄清液体，无噬菌体、超低内毒素，无溶血无异物无细菌真菌支原体霉形体衣原体等，适用于试验室或生化科研相关试验，满足不同科研实验的多种需求。

鸡血清来源于非免疫的鸡宿主，经过脂质萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。推荐用PBS将封闭血清原液稀释5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在组织切片或者细胞涂片上，37℃度孵育10-30分钟，清除血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃过夜。注意：封闭用血清中不能含有目标蛋白，且与一抗来源不同，可用与二抗相同来源的封闭血清。

鸡血清各项质量指标符合2005版《中华人民共和国药典》第三部附录的要求。1、性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。2、蛋白质含量3.5%～5.0%（w/v）3、血红蛋白含量≤0.02%（w/v）4、无菌检验阴性5、支原体检验阴性、6、细菌内毒素≤5（EU/ml）7、牛腹泻病毒阴性8、大肠杆菌噬菌体阴性9、支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14)生长曲线（接种浓度）增殖浓度≥2.5×106个/ml细胞倍增时间≤15h、克隆率≥85％。

鸡血清、血清的主要成分：血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡。

鸡血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。血清必须贮存于–20～-70 oC，若存放于4度，不能超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml分装于无菌50 ml离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10%，必须预留10%膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂。

瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法):从-20 oC或–70 oC取出放至4 oC冰箱溶解一天，再置于室温下全溶后分装，一般50 ml无菌离心管可分装40～45 ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沈淀的发生。切勿直接由–20 oC直接至37 oC解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。勿将血清置于37 oC太久，若在37 oC放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

应用^[8][9]

用于杂交瘤细胞、骨质瘤细胞、原代、传代细胞等细胞培养及疫苗、诊断试剂生产；鸡血清IgG的纯化及其单抗制备与鉴定：

IgG是血清中主要的免疫球蛋白(Ig),占血清Ig总量的75%~80%,它是血液中主要的抗体成分,血清中IgG水平的测定,已是疫苗免疫效果评定和体液免疫研究的常用指标。与常规免疫血清相比,单克隆抗体具有与抗原结合的高特异性,是免疫学和血清学研究的重要工具,在畜牧兽医的疾病诊断与治疗方面已经被广泛应用。在养禽业中,运用这些单克隆抗体来检测疫病特异性的抗体,对全面、系统地了解禽的机体对病原体感染的免疫应答反应并采取相应的防制措施有重要意义。

参考文献

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[9]王骏俊.鸡血清IgG的纯化及其单抗制备与鉴定[D].安徽农业大学,2010.