大蒜中蒜氨酸含量的测定

蒜氨酸是一种有机化合物，是大蒜中主要生物活性物质之一，也是大蒜中独有的含硫化合物。作为大蒜中独特的非蛋白类含硫氨基酸，现代医学表明：蒜氨酸具有抗肿瘤、协同降血压、抗菌杀毒、清除自由基、保肝护肝及抗糖尿病等多种药理功效。

1、测定原理

  大蒜中蒜氨酸在紫外光区214 nm波长处有最大吸收,经灭酶、磷酸溶液提取、HPLC分离后,紫外检测器测定,外标法定量。

2、实验试剂

  甲醇(CH:OH):色谱纯

  磷酸(H:PO):优级纯

  磷酸溶液(0.01%,体积分数):准确吸取0.100 mL.磷酸于预先加入一定量水的1 000 mL容量瓶,稀释至刻度,经0.22 um水相滤膜过滤。

  蒜氨酸标准储备液(500 mg/L):称取蒜氨酸标准品5 mg(精确至0.01 mg)于10 mL容量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀备用。

3、样品处理   

  取样品于微波功率900 W高火灭酶1 min,冷却至室温,用水补充微波灭酶过程中损失的质量,再按质量比1∶1加水,用组织捣碎机粉碎制成蒜泥,作为试样。称取试样⒉g(精确至0.001 g)于 100 mL三角瓶中,加入60 mL磷酸溶液，手动振荡1 min后超声提取15 min,静置至恢复室温,用磷酸溶液转移至100 mL容量瓶中并定容，取10 mL溶液于10 mL离心管中,10 000 r/min离心15 min,上清液过0.22 um水相滤膜,待测。

4、样品测定

（1）色谱条件

  a)色谱柱:C18色谱柱,长250 mm,内径4.6 mm,粒径5um;

  b)柱温:30℃;

  c)流动相:磷酸溶液；

  d)流速; 0.8mL/ min;

  e)检测波长:214 nm;

  f)进样体积：10uL。

（2）标准系列溶液测定

  准确吸取一定量的蒜氨酸标准储备液 ,用水配制成浓度约为10mg/L,20 mg/L,50 mg/L,100 mg/L,250 mg/L的系列标准溶液供高效液相色谱仪测定。

（3）上机测定

  在上述液相色谱参考条件下,将标准系列溶液、试样溶液注入高效液相色谱仪,,采用单点或多点校正,以保留时间定性，以色谱峰面积外标法定量。

5、结果计算

   试样中蒜氨酸的含量以质量分数w表示,单位为g/kg,按下式计算:

W=ρ*V*2/m/1000

  式中:  

  ρ—待测液中蒜氨酸质量浓度数值,单位为毫克每升(mg/L)；

  V—定容体积数值,单位为毫升(mL);

  2—样品按质量比1:1加水的换算系数;

  m —试样的质量,单位为克(g)。