红细胞去除试剂盒的使用方法

背景及概述^[1]

红细胞去除试剂盒使用浮力，能够清除掉样本中99%以上的红细胞，同时并不残留血红蛋白等物质，使得目的细胞使用不受红细胞的干扰，能够更好的进行下游应用和分析。

使用方法^[2]

CN201110097319.7 提供了一种用于体外分离纯化骨髓、脐带血或外周血中有核细胞并且能去除红细胞的试剂盒以及该试剂盒的使用方法。本发明所述的试剂盒包括各自隔离包装的沉淀液、纯化液、悬浮液和红细胞裂解液，其中沉淀液是溶于生理盐水的羟乙基淀粉，其重量体积浓度为6％；纯化液是聚蔗糖泛影钠；悬浮液是生理盐水；红细胞裂解液包括各自隔离包装的两种原液，其中原液1号由以下配方组 成：10g/L葡萄糖、0.6g/L磷酸二氢钾、3.58g磷酸氢二钠·7H₂O和0.1g/L酚红溶液，原液 2号由以下配方组成：1.86g/L氯化钙·2H₂O、4.0g/L氯化钾、80g/L氯化钠、1.04g/L氯化镁和2.0g/L硫酸镁·7H₂O。所谓隔离包装是指沉淀液、纯化液和悬浮液各自密封在互不相通的容器中，优选地，各自独立包装。

使用方法包括如下步骤：

(1)将经过抗凝处理的骨髓/脐带血/外周血倒入沉淀液试剂瓶中，拧紧瓶盖颠倒混匀 5次，拧松瓶盖，静置22‑25分钟。

(2)用10ml的移液管将上清液转到两个50ml的离心管中，不要吸到红细胞沉淀，并配平。

(3)将两个离心管4℃，离心力710xg(转速2000rpm)，5分钟离心，离心完毕后，弃去上清，用手指轻轻震开沉淀，每管加25ml生理盐水重悬细胞。

(4)将纯化液按每管25ml加到另外两个50ml新的离心管中，将第3步中的细胞悬液用移液管缓慢加到纯化液的液面上，保证两种液体之间的液面清晰，然后，4℃，离心力710xg(转速2000rpm)，20分钟离心，关闭离心机刹车功能。

(5)离心后，吸取中间层细胞，加到新的离心管中，用50ml注射用生理盐水稀释，配平，4℃，离心力400xg(转速1500rpm)；8分钟离心洗涤细胞两次；

(6)弃上清，向细胞沉淀中加入应用液1#，轻轻吹打15～20s混匀，再加入应用液2#，轻轻吹打15～20s混匀，最后加入应用液3#，轻轻吹打15～20s混匀，逐步裂解残留红细胞。

(7)4℃，离心力400xg(转速1500rpm)，8分钟离心洗涤细胞三次；

(8)将洗后的细胞加到悬浮液中，备用。

本发明所述的试剂盒，使用的样品类型为骨髓/脐带血/外周血，可以按照通用的方法收 集所需的骨髓/脐带血/外周血样本；确保骨髓/脐带血/外周血收集后转入一次性抗凝血袋； 骨髓/脐带血/外周血收集后应在6小时内进行分离纯化有核细胞。本发明所述的试剂盒，回收率可以达到》90％，分离的有核细胞活率≥96％，程度地维持了干细胞在体外微环境的恒定，且能同时裂解有核细胞中的红细胞。

主要参考资料

[1] 红细胞去除试剂盒说明书

[2] CN201110097319.7 体外分离纯化有核细胞且能去除红细胞的方法和试剂盒