STAT5抗体的应用

背景^[1-3]

STAT5抗体是一种针对信号转导和转录激活因子5（Signal Transducer and Activator of Transcription 5，简称STAT5）的特异性抗体。STAT5在生物体内扮演着重要的角色，通过JAK-STAT途径参与多种信号传导过程，包括生长激素受体信号通路和生长调节，以及影响动物器官发育、白细胞增殖的正调节和造血功能的调节等。

STAT5是一种转录因子，属于信号转导和转录激活蛋白（STAT）家族，在多种细胞过程中起到关键作用，包括细胞生长、分化和免疫调节。在临床研究中，STAT5抗体常用于诊断和研究某些类型的癌症，如白血病和淋巴瘤，以及评估患者对某些治疗的反应。

具体来说，STAT5抗体（ab16276）是一种兔多克隆抗体，它不与任何其他STATs或相关蛋白发生交叉反应。这种抗体适用于人样本，并且可以预测用于绵羊、牛等其他物种。它使用合成的肽段作为免疫原，其免疫原序列对应于人类STAT5蛋白的371-389氨基酸序列。

在使用STAT5抗体时，推荐的起始稀释浓度为1µg/ml，适用于WB和ICC/IF实验。WB实验中预测的分子量为90 kDa。这种抗体可以帮助研究者更好地理解STAT5在细胞信号传导和转录激活中的作用.

STAT5抗体

以下是对STAT5抗体的详细介绍：

一、基本信息

目标蛋白：信号转导和转录激活因子5（STAT5）

抗体类型：根据不同供应商，可能是单克隆抗体或多克隆抗体

宿主：多为兔源

分子量：预测分子量约为90-91 kDa

应用领域：科研，包括但不限于Western Blotting（WB）、免疫细胞化学/免疫荧光（ICC/IF）、免疫沉淀（IP）等

二、产品特性

特异性：STAT5抗体能够特异性地识别并结合STAT5蛋白，减少非特异性结合和背景干扰。

敏感性：高敏感性的STAT5抗体能够在低浓度下检测到STAT5蛋白的表达，提高实验的灵敏度和准确性。

稳定性：经过严格的质量控制和稳定性测试，确保STAT5抗体在储存和使用过程中的稳定性。

三、使用注意事项

稀释倍数：不同的实验方法需要不同的抗体稀释倍数，具体请参考各供应商的产品说明书。

储存条件：通常建议在-20°C或更低温度下储存STAT5抗体，避免反复冻融对抗体活性的影响。

操作规范：严格按照产品说明书中的操作步骤进行，确保实验结果的准确性和可靠性。

应用^[4][5]

STAT5抗体可以用于STAT5在胶质瘤组织及细胞中的激活及功能研究

调查胶质瘤组织中STAT5的激活现象,并探讨在体外胶质瘤细胞中磷酸化的STAT5对细胞增殖和侵袭的影响。

材料与方法1、组织芯片的制备。肿瘤样本来源于中国医科大学附属第一医院和北京天坛医院诊断为胶质瘤并接受治疗的患者的术中样本。诊断标准根据WHO标准。本研究基于赫尔辛基宣言标准,并被当地医疗机构的伦理委员会批准并同意使用来源于两所医院的组织样本进行科学研究。实验组标本来源于胶质瘤患者术中瘤组织,对照组非肿瘤样本来源于癫痫患者行颞叶切除术的脑组织。组织在切除后快速液氮冷冻,福尔马林固定,石蜡包埋。根据文献报道,用组织芯片机(Beecher Instruments,Silver Springs,MD,USA)制备组织芯片。组织芯片样本包括25例散发星形细胞瘤(Ⅱ级),27例间变星形细胞瘤(Ⅲ级)和124例胶质母细胞瘤(Ⅳ级)。在每个胶质瘤典型病变区域提取两个0.6mm孔径的组织样本,制作成由352个微点阵构成的组织芯片。另外,选取13例癫痫手术切除的非瘤脑组织制作成组织芯片,作为对照。

2、STAT5抗体免疫组化染色。用石蜡切片机将石蜡包埋的组织芯片的标本切割成厚度为4μm的切片,贴附与防脱载玻片上,65℃烘干30分钟。将石蜡切片用二甲苯脱蜡,水化,浸入EDTA中,高压锅抗原修复。3%H2O2灭活,山羊血清封闭。p-STAT5抗体a/b(Tyr694/Tyr699)(Santa cruz Biotechnology,Inc,CA,USA)1：50稀释,4℃孵育过夜。阴性对照组用山羊血清替代一抗4℃孵育过夜。HRP标记的二抗(KIT-5930,MaxVision,Fu Zhou,China)室温孵育30分钟。DAB显色5分钟。苏木素复染,Permount(BIOS,Beijing,China)封片。显微镜(Olympus Optical,Japan)观察,图像采集。免疫组化染色强度由两位病理学专家分别进行观察并结合瘤细胞阳性染色比例和染色强度进行判定。

根据两位专家判定分数的均值,对p-STAT5的表达情况进行进一步的对比评估。瘤细胞阳性染色比例分级如下：0(无瘤细胞着色),1(瘤细胞着色比例<10%),2(瘤细胞着色比例为10-50%),3(瘤细胞着色比例>50%)。着色的瘤细胞比例>20%认为有STAT5的持续激活。染色强度分为0(无着色),1(弱着色,呈淡黄色),2(中等着色,呈黄褐色),3(强着色,呈棕色)。染色指数的的计算方法如下：染色指数=染色强度×阳性染色比例。染色指数≥4,被认为瘤组织中STAT5的激活水平较高,染色指数<4,被认为STAT5的激活水平较低。

3、STAT5抗体免疫荧光分析。用0.25%胰酶消化对数增长期的U87-MG细胞,制成细胞悬液,以6×103细胞／孔加入6孔细胞培养板(内放盖玻片)。24小时后移去培养基,PBS洗1次,饥饿培养过夜,替换为含100ng/mlEGF的完全培养基继续培养1小时,用4%多聚甲醛固定10分钟。0.25%Trixton X-100的PBS作用10分钟,血清封闭1小时。加入p-STAT5抗体(1：50稀释),4℃孵育过夜,Cy3标记羊抗兔抗体(1：400稀释),PBS洗3次,室温孵育2小时。用荧光显微镜Leica DMIRE2(Leica Microsystems Ltd,Germany)观测,采集图像。

参考文献

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[3]Atiprimod blocks phosphorylation of JAK-STAT and inhibits proliferation of acute myeloid leukemia(AML)cells[J].Stefan Faderl;;Alessandra Ferrajoli;;David Harris;;Quin Van;;Hagop M.Kantarjian;;Zeev Estrov.Leukemia Research,2006(1)

[4]STAT 5a expression in the breast is maintained in secretory carcinoma,in contrast to other histologic types[J].Brian L.Strauss;;Gary L.Bratthauer;;Fattaneh A.Tavassoli.Human Pathology,2006(5)

[5]曹守强.STAT5在胶质瘤组织及细胞中的激活及功能研究[D].中国医科大学,2010.