NPM抗体的应用

背景^[1-3]

NPM抗体是用于研究NPM1（也称为B23、numatrin或NO38）蛋白的抗体。NPM1是一种广泛表达的磷酸蛋白，主要存在于核仁中，参与多种细胞功能，包括核糖体的组装和运输、细胞质/核转运、DNA聚合酶α活性的调节、中心体复制以及分子伴侣活性等。NPM1基因与几种肿瘤相关染色体易位有关，因此被认为是几种融合蛋白的一部分，例如NPM-ALK、NPM-RAR和NPM-MLF1。

使用NPM抗体时，研究人员能够检测和定量NPM蛋白的表达水平，从而评估其在疾病状态下的变化。例如，在某些癌症研究中，通过免疫组织化学技术，研究人员可以观察NPM在癌细胞中的定位和表达量，这有助于了解其在肿瘤发生和发展中的作用。此外，NPM抗体还可用于纯化NPM蛋白，进一步研究其结构和功能。

NPM抗体

以下是一些提供NPM抗体的供应商及其产品信息：

Cell Signaling Technology提供NPM1多克隆抗体（产品编号3542），适用于Western Blot。推荐的稀释比例如下：Western Blotting 1:1000。这种抗体来源于兔子，可检测人、鼠、大鼠的NPM1蛋白。

Invitrogen提供多种NPM1抗体，包括多克隆、单克隆和重组单克隆抗体。这些抗体适用于免疫组织化学、Western Blot、免疫细胞化学、ELISA和流式细胞术等多种应用。它们针对人、鼠、大鼠、非人灵长类和两栖动物样本。

Proteintech提供NPM1多克隆抗体（产品编号10306-1-AP），适用于Western Blot、免疫组化、免疫荧光/免疫细胞化学、免疫沉淀、共免疫沉淀、染色质免疫沉淀、ELISA等多种应用。这种抗体来源于兔子，为IgG类型。

在使用NPM抗体时，应根据实验需求和所选抗体的说明书来调整稀释比例和实验步骤。不同抗体可能会有不同的最佳使用条件，因此在实验前仔细阅读抗体的使用说明非常重要。

应用^[4][5]

NPM抗体可以用于靶向CDK4胞内抗体对乳腺癌细胞中NPM1的表达及其活性的影响

前期研究中,成功制备了核定位型抗CDK4胞内抗体NLS-AK3,通过体内外研究表明,NLS-AK3能在癌细胞中特异性结合内源的CDK4蛋白,并具有良好的抑瘤效应。通过差异蛋白质组学分析发现,MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞中抗CDK4胞内抗体NLS-AK3的表达,显著下调NPM1蛋白水平。核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM1)是一种多功能蛋白,在多种肿瘤中均存在过度表达,促进癌细胞的增殖和转移。研究发现,NPM1可以直接结合Rb、FOXM1、NF-κB/p65、STAT3、c-myc等Cyclin D1/CDK4直接下游靶点,影响这些蛋白功能及其参与的细胞活动,促进肿瘤细胞的增殖和转移。

为了确定核定位型抗CDK4胞内抗体NLS-AK3对三阴性乳腺癌细胞中NPM1表达及其相互作用因子的影响,本研究开展了Western blot、实时荧光定量PCR、GST pull down、免疫共沉淀等一系列实验分析,取得如下结果:(1)NPM抗体Western blot和Q-PCR结果表明,在MDA-MB-231细胞中胞内抗体NLS-AK3不仅下调NPM1蛋白水平,而且抑制NPM1的m RNA表达。

(2) 通过Gene MANIA网站预测CDK4与NPM1可能存在相互作用,之后通过间接免疫荧光实验,GST pull downa分析他们之间的联系。NPM抗体间接免疫荧光实验结果表明CDK4与NPM1在三阴性乳腺癌细胞的细胞核中共定位。利用亲和层析纯化法纯化GST-NPM1和GST蛋白,通过GST-NPM1对MDA-MB-231细胞核蛋白进行GST pull down分析,结果表明,NPM1与MDA-MB-231细胞中CDK4、Rb、磷酸化Rb、NF-κB/p65存在相互作用。

(3)NPM抗体Western blot结果表明,MDA-MB-231细胞中NLS-AK3的表达,不影响Rb总蛋白水平,但降低磷酸化Rb水平,下调细胞核内NF-κB/p65水平。免疫共沉淀实验结果表明,在MDA-MB-231细胞核中胞内抗体NLS-AK3抑制NPM1与CDK4、Rb、磷酸化Rb、NF-κB/p65之间的相互作用。(4)通过Q-PCR检测了NLS-AK3对NF-κB/p65下游基因转录的影响。发现胞内抗体NLS-AK3下调E2F、CCNE1、CDK2、Cyclin A、CDC2、PCNA、c-myc,Bcl-2的m RNA水平,上调Bad的m RNA水平。上述研究结果表明,NLS-AK3可能通过抑制NPM1表达,抑制NPM1与CDK4、磷酸化Rb及NF-κB/p65相互作用,抑制三阴性乳腺癌细胞增殖。

参考文献

[1]Cink4T,a quinazolinone-based dual inhibitor of Cdk4 and tubulin polymerization,identified via ligand-based virtual screening,for efficient anticancer therapy[J].Vinay Sonawane;;Mohd Usman Mohd Siddique;;Surender Singh Jadav;;Barij Nayan Sinha;;Venkatesan Jayaprakash;;Bhabatosh Chaudhuri.European Journal of Medicinal Chemistry,2019

[2]Cyclin-dependent protein serine/threonine kinase inhibitors as anticancer drugs[J].Robert Roskoski.Pharmacological Research,2019

[3]Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].Freddie Bray BSc,MSc,PhD;;Jacques Ferlay ME;;Isabelle Soerjomataram MD,MSc,PhD;;Rebecca L.Siegel MPH;;Lindsey A.Torre MSPH;;Ahmedin Jemal PhD,DVM.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2018(6)

[4]CDK4-6 inhibitors in breast cancer:current status and future development[J].Choo;;Lee.Expert Opinion on Drug Metabolism&Toxicology,2018(11)

[5]仲文.靶向CDK4胞内抗体对乳腺癌细胞中NPM1的表达及其活性的影响[D].吉林大学,2019.