2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐的相关应用研究

2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐是脱氧腺苷三磷酸钠盐形式，简称dATP。它是一种核苷酸衍生物，是DNA和RNA的组成部分之一。2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐主要用作生物化学和分子生物学的研究工具，常用于DNA合成和PCR反应中。它在细胞生物学和分子生物学实验中起着重要作用，如在转录、转录后修饰和蛋白质合成过程中。

应用研究

1、周毅等人以磷酸二氢钠和磷酸氢二钠与2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐的混合溶液为磷标样，比较了MgSO4,Mg(NO3)2和MgCl2等灰化助剂的作用效果。结果发现 ,磷标样中加入MgSO4经500℃灼烧后用0.2mol/L HCl于80℃浸提残渣0.5h不能使磷全部回收；而MgCl2 、Mg(NO3)2 、MgAc2、CaCl2等助剂，却都能使灼烧后的磷完全回收。在采用MgSO4高温灰化法分析海水中的颗粒磷和总磷或有机体中的磷时，应当用MgCl2作为灰化助剂取代MgSO4。尽管Mg(NO3)2也是高效的灰化辅助剂[1]。

2、高义平等人在不添加Mn2+、不调整其它任何PCR成分的情况下,通过降低2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐浓度的底物不平衡作用,对洋葱抗菌蛋白基因Ace-AMP1和苏云金芽胞杆菌毒蛋白(Bt)基因cry1A(c)进行了PCR诱变。结果表明:随着2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐浓度的降低,序列变异率和碱基突变率均呈升高趋势。当dTTP/dCTP/dGTP∶dATP在20∶1-40∶1时,碱基突变率介于1.4%-1.8%之间,序列变异率介于77.8%-100%之间。该方法简化了常规易错PCR诱变中的条件优化过程,简单实用。降低2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐浓度的诱变方法主要引起AT→GC的变异,适用于提高靶基因GC含量的体外诱变[2]。

3、曹佳佳等人以DNA聚合酶η为研究对象,通过计算分子模拟对接的方式,对其可能的小分子抑制剂进行筛选,并对其酶动力学参数进行测定。结果显示:2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐(dATP)对DNA聚合酶η的活性具有抑制效果,使其延伸的相对效率为36%~42%。分子模拟对接和体外实验结果表明,相较于2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐(亲和力为-26.7 kJ/mol),环鸟苷酸-腺苷酸(cyclic GMP-AMP,cGAMP)与DNA聚合酶η具有更低的结合能(亲和力为-35.1kJ/mol)。酶动力学参数测定结果也表明,相较于2’-脱氧腺苷-5’-三磷酸二钠盐,cGAMP具有更强的抑制能力且在浓度为0.5mmol/L时达到最强(相对延伸效率为13%)。因此,本研究筛选获得了针对DNA聚合酶η的一种潜在的小分子抑制剂。同时,鉴于该蛋白质高表达导致细胞对抗肿瘤药物(DNA损伤剂)的耐受性,这为新型药物的开发提供了依据[3]。

参考文献

[1]周毅,张福绥,杨红生,马锡年.灰化法磷测定中不同灰化助剂的效果比较[J].分析试验室,2001,20(6):58-61.

[2]高义平,赵和,吕孟雨,孙果忠,杨学举,王海波.一种降低dATP用量的简单易错PCR方法[J].微生物学报,2014,54(1):97-103.

[3]曹佳佳,叶舒迈,赵烨.DNA聚合酶η小分子抑制剂筛选[J].浙江大学学报（农业与生命科学版）,2024,50(1):35-41.