阿朴啡型生物碱——荷叶碱

概述

荷叶碱是荷叶中的一种阿朴啡型生物碱，为荷叶中的主要降脂活性成分。通常，高纯度的荷叶碱为米黄色至类白色结晶性粉末，纯度越高，色泽越浅。中医学认为，荷叶性味苦涩，有清暑利湿、升发清阳、凉血止血等功效。荷叶中的生物碱有降血脂作用、抗自由基、抑制高胆固醇血症和动脉硬化等药疗、食疗功效，而且还具有抗有丝分裂的作用，有较强的抑菌效果。

比较荷叶不同生长期荷叶碱的含量，采用高效液相色谱法，对不同生长期荷叶所含荷叶碱的含量进行比较。结果发现，处于不同生长期的荷叶所含荷叶碱的含量存在一定差异，随荷叶从幼叶生长荷叶碱量逐渐增加，至成熟期达最高。整个生长过程中差异不是特别大，而当荷叶开始衰老时荷叶碱含量急骤下降。为保证荷叶质量，应掌握好采收期[1]。

提取工艺

优选荷叶中荷叶碱的超声提取工艺。以荷叶碱的提取率为指标，首先进行单因素试验，并且在此基础上以乙醇浓度、提取温度、提取时间及料液比为影响因素进行正交设计试验，优化提取工艺。结果，当用90%的乙醇，料液比为1︰40，提取温度为60℃，提取时间为25 min，提取一次，提取率最大，此时荷叶中荷叶碱的含量占总体取物的1.12%。该实验为优化荷叶中荷叶碱的超声提取工艺提供了参考依据[2]。

分类

荷叶碱为中药荷叶Nelumbinis Folium中的主要药效活性成分，具有降血脂，抗炎，抗氧化等生物活性。目前关于荷叶碱的药代动力学及生物利用度报道的结果存在较大差异。实验利用多种生物药剂学评价模型，对中药材中荷叶碱进行生物药剂分类学研究(biopharmaceutical classification system,BCS)。其中，荷叶碱平衡溶解度采用了理想溶液模型，Apelblat模型，多项式模型(经验模型)进行测定及关联性评价。渗透性采用油水分配系数logP，分布系数logD以及细胞和组织表观渗透系数研究。荷叶碱溶解度受环境pH影响在酸性条件下属于BCSⅠ类。近中性及碱性环境下，BCS分类结果出现差异。以外翻肠囊法所得肠组织表观渗透系数荷叶碱渗透性较差，为BCSⅣ类[3]。

含量测定

建立HPLC测定荷叶中荷叶碱含量的方法。方法：采用Symmetry—C18柱(3.9mm×150mm,5μm)，流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(56:44:1:0.15)，流速：0.5mL·min^-1，检测波长：270nm，柱温：25℃。结果，荷叶碱在3.00～15.00μg/mL范围内具有良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为98.3%，RSD=2.1%(n=5)。结论：该测定方法简便，准确，灵敏度高，重复性好，可用于荷叶成分的含量测定[4]。

溶出度研究

为考察药材粒径、溶液pH对荷叶中荷叶碱溶出度的影响，采用HPLC法考察药材粒径、溶液pH对荷叶碱溶出规律，并采用Weibull模型、相似因子法对其数据进行处理并评价其溶出曲线。结果发现，荷叶碱的溶出量随时间延长而增加，溶出量为中粉>细粉>最细粉>粗粉。在不同缓冲溶液中溶出量为pH 1. 2>pH 4. 5>水>pH 6. 8。该研究从动力学角度描述了药材提取过程，为中药开发和应用提供了方法和思路[5]。

光谱学研究

实验采用荧光光谱，紫外-可见光谱和盐效应等手段研究荷叶碱与小牛胸腺DNA(ct-DNA)之间的相互作用，并在pH7.4的Tris-HCI介质中，以中性红为荧光探针，对其作用机理进行研究。结果表明：在生理条件下(pH7.4)，荷叶碱与DNA发生作用方式为混合方式，嵌插与沟槽作用是两种主要作用方式，DNA对荷叶碱荧光猝灭属于静态猝灭，测得其结合常数为1.396×10⁶ L/mol[6]。

药理活性

基于网络药理学探究荷叶碱抑制人肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖的分子机制。采用MTT比色法，克隆形成实验检测荷叶碱对HuCCT1细胞增殖的影响。采用比色法，分光光度法检测荷叶碱对糖酵解生化指标的影响。通过网络构建和富集分析预测荷叶碱作用于肝内胆管癌的潜在靶点及通路，以此为基础探究荷叶碱影响HuCCT1细胞增殖的可能机制。结果表明，荷叶碱能抑制HuCCT1增殖，显著降低细胞葡萄糖消耗及乳酸生成，并呈时间和剂量依赖性。网络药理学分析显示荷叶碱主要通过PI3K/Akt，MAPK，HIF-1信号通路影响肝内胆管癌生长，运动。聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)结果显示，(30,60,120μmol/L)荷叶碱能降低低氧诱导因子-1α(HIF-1α)，己糖激酶2(HK2)和丙酮酸激酶2(PKM2)的mRNA水平和蛋白表达，同时下调p-Akt^(Thr308),p-mTOR，p-4EBP1蛋白表达。综上，荷叶碱可能通过影响Akt/mTOR/4EBP1信号级联调控的糖酵解活性抑制HuCCT1细胞增殖[7]。

微球技术

中药学技术领域公开了一种荷叶碱微球及其制备方法，相关的荷叶碱微球的载药量为5～50wt%，圆整度好，在水溶液中分散性好，粒径分布在10～50μm范围内。具体制备过程如下：将载体材料和荷叶碱溶解于水或磷酸盐缓冲液中得到水相；将司盘80或司盘60和液体石蜡混匀得到油相；将将水相滴加至油相搅拌均匀至乳白色，然后冰浴下继续乳化；加入戊二醛交联固化，再以异丙醇脱水搅拌，抽滤；洗去戊二醛和液体石蜡，干燥得到荷叶碱微球[8]。

参考文献

[1]钟世安,乔蓉,李维,等.采用酶法提取荷叶中的荷叶碱[J].中南大学学报：自然科学版, 2007, 38(6):5.DOI:10.3969/j.issn.1672-7207.2007.06.021.

[2]周韵,罗佳玲.正交法优化荷叶中荷叶碱的超声提取工艺[J].广东化工,2017,44(13):92-93.

[3]赵珺睿,任晓亮,王萌.荷叶药材中荷叶碱生物药剂学分类系统研究[J].中国中药杂志, 2018, 43(3):9.DOI:10.19540/j.cnki.cjcmm.20171023.001.

[4]柴金玲,李伟,谷学新.高效液相色谱法测定荷叶中荷叶碱的含量[J].药物分析杂志, 2005, 25(8):3.DOI:CNKI:SUN:YWFX.0.2005-08-012.

[5]韩婷婷,任晓亮,任德飞,等.荷叶中荷叶碱的溶出度考察[J].中国现代中药,2018,20(09):1126-1130.DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.20180507001.

[6]单斌,邓泽元,谢建华,et al.荷叶碱与ct-DNA相互作用的光谱法研究[J].食品科学, 2009(13):4.DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2009.13.002.

[7]屈雅琴,张倩玉,谈相云,等.荷叶碱抑制Akt/mTOR/4EBP1-糖酵解通路抗胆管癌细胞增殖作用研究[J].天然产物研究与开发, 2023, 35(8):1297-1304.

[8]宋杨一嫣,宋金春,彭燕,等.一种荷叶碱微球及其制备方法:CN201310434000.8[P].CN103520114A.