细胞迁移与侵袭检测服务

背景^[1-7]

细胞迁移与侵袭检测服务主要利用Transwell小室进行肿瘤细胞迁移的检测，常用8.0µm膜，上室接种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。而对肿瘤细胞侵袭的检测，则需要预先用matrigel包被Transwell小室。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室接种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞需要分泌某种特定的蛋白质，将基质消化后才可以从上室迁移到下室，计数进入下室的细胞量，即可测定细胞的侵袭能力。

肿瘤细胞迁移（migration）与侵袭（invasion）检测均为能够间接反映肿瘤迁移或侵袭能力，或特定情况下的迁移或侵袭能力的实验。通过研究肿瘤细胞的迁移与侵袭能力，能够为探究肿瘤发生及转移的机制提供重要的实验支撑。肿瘤细胞迁移是恶性肿瘤最重要的特征之一，瘤细胞由其原发部位侵入血管或淋巴管或体腔，部分细胞被血液、淋巴液带到另一部位或器官，在该处繁殖生长，形成与原发瘤同样类型的肿瘤，这一过程即为肿瘤的侵袭和转移。

目前检测肿瘤细胞迁移的方法主要有细胞划痕实验及Trans-Well小室迁移实验，传统的细胞划痕实验需要连续观测以评估药物对细胞迁移的作用，因此，其面临的的问题是不能保证每次观察的都是同一位点，对结果不能进行定量分析，也不能区分划痕内的细胞是迁移还是增殖的而来的。而Trans-Well小室迁移实验虽能定量检测细胞迁移的数量，但不能直观观测细胞迁移过程，也不能将迁移和增殖细胞区分出来，而且其价格昂贵，不适合抗肿瘤细胞迁移药物的大规模筛选。

胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

应用^[8][9]

细胞迁移与侵袭检测服务可用于研究细胞迁移与侵袭抑制药物的研究：

LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响。划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株。

免疫组化和Western blot显示,45 mg.L-1DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调(P<0.05)。划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制(P<0.05)。而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显(P<0.05)。结论沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用。

参考文献

[1]Suppression of the invasivecapacity of rat ascites hepatoma cells by knockdown of Slingshot orLIM kinase.Horita Y,Ohashi K,Mukai M,et al.Journal of Biological Chemistry.2008

[2]Lim kinases,regulators of actin dynamics.Bernard O.International Journal of Biochemistry Cell Biology The.2007

[3]Regulation of the actin cytoskeleton in cancer cell migration and invasion.Yamaguchi H,Condeelis J.Biochimica et Biophysica Acta.2007

[4]LIM kinase 1 is essentialfor the invasive growth of prostate epithelial cells:implications in prostatecancer〔J〕.Davila M,Frost AR,DerMardirossian C,et al.Journal of Biological Chemistry.2003

[5]LIM kinase1 increases tumor metastasis of human breast cancer cells via regula-tion of the urokinase-type plasminogen activator system.Bagheri-Yarmand R,Mazumdar A,Sahin AA,et al.International Journal of Cancer.2006

[6]Global cancer statistics.Jemal A,,Bray F,Center M M,et al.CA A Cancer Journal for Clinicians.2011

[7]Multitargeted prevention and therapy of cancer by diallyl trisulfide and related Allium vegetable-derived organosulfur compounds.Powolny AA,Singh SV.Cancer Letters.2008

[8]Diallyl disulfide inhibits the pro-liferation of HT-29 human colon cancer cells by inducing differen-tially expressed genes.Huang Y S,,Xie N,Su Q,et al.Mol Med Report.2011

[9]苏坚,周钰娟,廖前进,史玲,夏红,苏琦.沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭[J].中国药理学通报,2013,29(06):760-766.