小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒是一种用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其他相关生物液体中铁蛋白浓度的实验试剂盒。这些试剂盒主要用于科学研究，不适用于临床诊断。以下是关于小鼠铁蛋白（FE）ELISA试剂盒的一些详细信息：

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒检测原理：试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。这种方法使用抗小鼠铁蛋白（FE）抗体包被于酶标板上，样品中的小鼠铁蛋白（FE）会与包被抗体结合，经过一系列步骤后，通过酶标仪在450 nm波长处测量吸光度（OD值），从而计算出样品中铁蛋白的浓度。

基本性能：

灵敏度：不同品牌的试剂盒灵敏度略有不同，例如有的试剂盒灵敏度为0.94 ng/mL。

检测范围：例如1.56-100 ng/mL，或15.6-1000 ng/mL（特殊要求可定制）。

特异性：可检测样本中的小鼠铁蛋白（FE），且与其他类似物无明显交叉反应。

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒组成：试剂盒通常包含预包被酶标板、标准品、稀释液、HRP标记抗体、显色底物、终止液等。

保存条件：试剂盒应在2-8°C保存，有效期标注于标签上（通常是6个月）。

样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等生物液体。

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒操作步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

应用^[4][5]

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒可以用于压力性损伤发生进展与铁代谢紊乱的相关性研究

基于人群的病例对照研究:（1）局部组织收集,于2019年12月-2021年12月在青岛大学附属医院收集了20例行伤口清创手术的3期和4期压力性损伤患者废弃伤口组织,并根据组织病理特征不同将其分为伤口边缘组织和伤口坏死组织;收集20例行骨折内固定物取出术的非压力性损伤患者的废弃正常组织作为对照组。通过苏木精伊红染色（Hematoxylin eosin staining,HE staining）、普鲁士蓝染色（Prussian blue staining,Perl’s Blue staining）、电感耦合等离子体质谱（Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS）和小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒检测比较伤口组织和正常组织中铁代谢相关指标:铁离子、转铁蛋白（Transferrin）、铁蛋白（Ferritin）水平差异性。

（2）血清收集,收集病例组196例压力性损伤患者和对照组196例非压力性损伤患者血清和临床信息。病例组分为1期压力性损伤、2期压力性损伤、3期压力性损伤和4期压力性损伤四个亚组。临床信息包括人口学资料（性别、年龄）和临床资料（血清转铁蛋白在内的多项实验室检测指标、合并症、压力性损伤患病史、受压部位疼痛情况、意识状态、呼吸形式、二便失禁状态以及压力性损伤伤口相关信息）;以是否发生压力性损伤为因变量,利用二元logistic回归分析压力性损伤发生与铁代谢指标水平的相关性,以压力性损伤不同分期为因变量,利用有序logistic回归分析压力性损伤进展与与铁代谢指标的相关性;利用血清白蛋白水平对压力性损伤与小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒结果血清转铁蛋白的相关性进行分层分析。

小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒动物实验结果:（1）组织铁代谢指标分析结果,除Model＿1d小鼠外,其他时间点压力性损伤模型小鼠伤口铁离子浓度均显著高于正常小鼠（P<0.05）;所有时间点模型小鼠伤口组织中转铁蛋白和铁蛋白水平均显著高于正常小鼠（P<0.05）。（2）小鼠铁蛋白(FE)Elisa试剂盒血清铁代谢指标分析结果,Model＿1d和3d小鼠血清转铁蛋白水平显著低于正常小鼠（P<0.05）,Model＿7d和14d小鼠与正常小鼠血清转铁蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）;除Model＿14d小鼠,Model＿1d、3d、和7d小鼠血清铁蛋白水平均显著低于正常小鼠（P<0.05）。

参考文献

[1]Rhinoceros Serum microRNAs:Identification,Characterization,and Evaluation of Potential Iron Overload Biomarkers[J].Wojtusik Jessye;Curry Erin;Roth Terri L..Frontiers in Veterinary Science,2021

[2]Iron in Cardiovascular Disease:Challenges and Potentials[J].Li Shizhen;Zhang Xiangyu.Frontiers in Cardiovascular Medicine,2021

[3]The Effect of the Flavonol Rutin on Serum and Liver Iron Content in a Genetic Mouse Model of Iron Overload.[J].Hawula Zachary;Secondes Eriza;Wallace Daniel;Rishi Gautam;Subramaniam V Nathan.Bioscience reports,2021

[4]Iron overload in the motor cortex induces neuronal ferroptosis following spinal cord injury[J].Feng Zhou;Min Lingxia;Chen Hui;Deng Weiwei;Tan Mingliang;Liu Hongliang;Hou Jingming.Redox Biology,2021

[5]郭景琳.压力性损伤发生进展与铁代谢紊乱的相关性研究[D].青岛大学,2022.