培养细胞总蛋白抽提试剂的使用方法

背景及概述^[1]

蛋白亦称蛋清、卵白。禽类。禽蛋的一部分。禽蛋壳膜里一层很厚的白色半透明的黏性半流动体。其接近蛋黄的部分比较浓稠，接近蛋壳的部分稀薄；新鲜蛋的蛋白较浓稠，反之蛋白稀薄。蛋白呈碱性，加热后呈固形物。每100g含水分84.4g、蛋白质11.6g、维生素B₂0.31mg、钾132mg。培养细胞总蛋白提取试剂温和，为防止在样品处理过程中的人为因素造成的蛋白质降解，培养细胞总蛋白提取试剂制备过程应在低温下进行，建议加合适的蛋白酶抑制剂，使用前数分钟内加入PMSF，PMSF的工作浓度为1mM。常见抑制剂包含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，但因抑制剂在提取试剂中不稳定，需使用前加入。

使用方法^[1]

1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。

2、预冷的PBS清洗贴壁的细胞2次，小心倾去PBS。

3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml抽提试剂中加入5µl蛋白酶抑制剂混合液，5µlPMSF和5µl磷酸酶混合液）。

4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（107个细胞中加入1ml抽提试剂；5×106个细胞中加入0.5ml抽提试剂），轻轻摇动5分钟。

5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动15分钟进行裂解。

6、裂解液于预冷的离心机中14，000xg离心15分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。

裂解液用量说明：用于不同规格标准培养板裂解液用量

主要参考资料

[1] 营养科学词典