哺乳动物组织蛋白抽提试剂的注意事项

背景及概述^[1]

哺乳动物蛋白抽提试剂能够快速，温和，高效的裂解哺乳动物细胞，有效提取细胞浆和细胞核蛋白。哺乳动物蛋白抽提试剂使用温和配方保证所提取蛋白保持生物学活性并可应用于多种蛋白分析试验，如：报告基因和酶活性测定，免疫检测，蛋白纯化等。提取后蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。哺乳动物蛋白抽提试剂中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

注意事项^[1]

1、本产品可有效裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞，较反复冻融或超声法具有更高提取效率。但对于组织蛋白的抽提，建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。

2、所列的是贴壁细胞蛋白提取的使用量，先收集细胞可以减少试剂用量从而获得更高的蛋白浓度。

3、可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。如2×106个Hela细胞约重20mg，需要加入200μl抽提试剂。

4、通过本产品提取的蛋白，可通过BCA法进行蛋白定量分析。

使用量推荐^[1]

使用方法：

1. 贴壁细胞蛋白抽提：在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。小心倾去贴壁细胞的培养液，使用PBS漂洗细胞。加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent(抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)，在冰上用枪头吹打贴壁细胞，将裂解液转移至离心管中，冰上孵育20分钟，让细胞充分裂解。14000×g离心5-10分钟。转移上清液至新管中，用于进一步分析。

2. 悬浮细胞蛋白提取：在蛋白抽提前取出实验所需Mammalian Protein Extraction Reagent进行预冷。将悬浮细胞2,500×g，离心10分钟，弃去上清。使用PBS漂洗细胞。2,500×g，离心10分钟，弃去上清。加入适量Mammalian Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。每100 mg细胞加入至少1ml 1×工作液。如提取的样本量较大，可首先使用少量1×工作液重悬细胞，然后加入剩余工作液。吹打均匀后，冰上放置20分钟，让细胞充分裂解。14000×g离心15分钟。转移上清至新管中，进行下一步分析。

主要参考资料

[1] 中国中学教学百科全书·生物卷