人小梁网细胞的体外培养

背景及概述^[1]

人小梁网细胞分离自眼球组织；小梁网又称滤帘、小带、房角网状组织。位于前、后境界线之间，为宽度0.5毫米的环形多层海绵状结构，由排列不甚规则之小梁带组成。每个小梁带均有圆形或椭圆形小孔，为一种粘多糖所包埋，并有一精细的神经轴突丛。小梁网位巩膜内沟内，其后2/3构成Schlemm氏管的内侧壁和房角的外壁。于子午线切面上呈三角形，三角形的尖端位于角膜后弹力层的止点和附近的角膜板层，此处稍隆起(即Schwalbe氏线)；底部和巩膜突与睫状体前面相连接；内侧作为前房角的外界；外侧同角巩膜邻接，且包围着Schlemm氏管构成其内壁。人小梁网细胞在眼内压调节中起着关键作用；小梁网细胞内有特定的神经递质和神经肽受体，其中包括肾上腺素、乙酰胆碱和神经肽Y。青光眼是由于眼内压力升高而造成的一种不可逆致盲眼病，小梁网细胞的体外培养是青光眼病因学研究的重要手段之一。在小梁网细胞中，一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制，小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。形态学观察可见，刚从组织块长出的原代细胞，形态各异，多数呈星状或不规则形。细胞有胞突，核椭圆形，胞体肥大，胞浆丰富，且可见吞噬颗粒。随着细胞的增生及相互融合为单层，细胞的形态趋于一致。胞浆的色素颗粒及胞突消失，排列紧密呈类似上皮细胞的扁椭圆形或不规则形。胞体透亮，包膜清晰。人小梁网细胞采用组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

体外培养

采用组织块培养方法进行体外细胞培养，二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法、倒置显微镜、透射电镜，免疫细胞化学等方法观察体外培养细胞的生物学特性并进行鉴定。结果显示组织块培养7～15d后可见细胞从其边缘向外生长。倒置显微镜下成梭形、圆形、椭圆形、并有多个突起；电镜可见人小梁网细胞表面有较多微绒毛，细胞间缝隙连接，胞质内见很多次级溶酶体。免疫细胞化学检测纤维黏连蛋白、层黏连蛋白和神经元特异性烯醇化酶染色阳性。这些特征可与角膜内皮细胞和巩膜成纤维细胞相鉴别。

主要参考资料

[1] 眼科大词典

[2] 人眼小梁网细胞的体外培养