HCCC-9810/人胆管细胞型肝癌细胞的应用

背景及概述^[1]

HCCC-9810细胞源自一位女性肝胆管细胞癌患者，呈上皮细胞样。HCCC-9810细胞染色体模式数为71，但其染色体数目可以在22-117的范围内变动。HCCC-9810细胞倍增时间为20.4小时；细胞内AFP、CEA和CA19-9的分泌水平低，HCCC-9810细胞在裸鼠中的成瘤率为20%。

应用^[2-3]

一、用HCCC9810/人胆管细胞型肝癌细胞研究藤梨根提取物及其在制备治疗胆管癌药物中的应用。CN201510226911.0提供的藤梨根提取物，通过超细粉碎、低温乙醇提取、减压蒸馏的乙醇提取方法制备而成，以人胆管癌细胞株QBC939和HCCC9810细胞作为研究对象，采用MTS法、流式细胞术、形态学观察，免疫印迹，及裸鼠移植瘤生长抑制实验等方法，从体内外两条途径观 察RAE对人胆管癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用，结果表明：

（1）RAE能够显著抑制 QBC939和HCCC9810两种胆管癌细胞的活性和生长，其细胞生长抑制率呈浓度依赖性；

（2） RAE可以强烈诱导两种胆管癌细胞凋亡，有效激活细胞内的凋亡蛋白激酶，如Caspase3， Caspase 8和PARP；

（3）RAE能够显著抑制胆管癌抑制瘤在动物体内生长。

综上所述，本发明制备的藤梨根提取物能够在体内、外显著抑制胆管癌细胞生长，并诱导其细胞凋亡，为治疗胆管癌临床药物的开发提供了新的方向。

二、用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液

液体活检临床检验分析过程的质量控制对检验结果的准确性具有重要影响，临床检验质量控制确保了临床检验的准确性和有效性。所以，液体活检临床应用首先要有稳定可靠的质控品，干式细胞质控品相对液态细胞质控品保存效期更长，质量更稳定。肿瘤细胞株作为研究细胞癌变机理、肿瘤转移、肿瘤放疗和化疗敏感性分子基础等生物医学问题的重要材料，在不影响其细胞膜结构、外观形态以及内部主要成分(DNA和蛋白质)的前提下，建立一套肿瘤细胞长期保存的方法有着重要意义，能够解决临床上液体活检项目对肿瘤细胞质控品的强烈需求。

目前高效地冷冻干燥肿瘤细胞株面临着许多技术问题。如细胞在降温和复温的过程中极容易受溶液冻结、融化、以及溶液渗透压力变化等因素的作用造成“溶液损伤”或“胞内冰损伤”，从而使得恢复率很低。因此，能保持肿瘤细胞膜的形态与结构及主要内容物活性的肿瘤细胞干式细胞质控品的制备方法是急需解决的问题。

CN201811307835.6提供一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液。

可通过以下技术方案实现：一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液，配方为：PBS中加入5％～25％(g/100mL) 的蛋白，3％～15％(v/v)细胞稳定剂A，1％～10％(g/100mL)细胞稳定剂B，0.01％～0.1％ (g/100mL)抑菌剂；其中所述的蛋白选自猪、牛、羊的酪蛋白、乳清蛋白或血清白蛋白中的一种或多种；所述的细胞稳定剂A选自猪、牛、羊血清或胎牛血清中的任意一种或多种；所述的细胞稳定剂B选自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、果糖、乳糖等糖类中的任意一种或多种。所述的细胞冷冻液用于制备冷冻干燥肿瘤细胞。本发明所述的细胞冷冻液在制备干式肿瘤细胞质控品中的应用。

一种干式肿瘤细胞质控品的制备方法，包括细胞的准备、细胞的固定和细胞的冷冻干燥；所述的细胞冷冻干燥步骤中使用本发明所述的细胞冷冻液。所述的细胞的准备包括细胞的复苏、细胞传代培养和细胞的收集；细胞的固定包括细胞固定和固定后细胞收集；细胞的冷冻干燥包括细胞与冷冻液共孵育和/或上冷冻干燥机冷冻干燥。所述的肿瘤细胞优选肺部肿瘤细胞、肝胆肿瘤细胞、食管肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胃部肿瘤细胞、结直肠肿瘤细胞、胰腺肿瘤细胞、甲状腺肿瘤细胞、乳腺肿瘤细胞、卵巢肿瘤细胞、子宫肿瘤细胞、脑部肿瘤细胞、白血病细胞、耳鼻喉肿瘤细胞、膀胱肿瘤细胞、肾脏肿瘤细胞、或其他肿瘤细胞。所述的肝胆肿瘤细胞选自：Hep G2、HuH-7、BEL-7402、BEL-7404、BEL-7405、Hep3B2.1-7、QGY-7701、QGY-7703、SK-HEP-1、SMMC-7721、Li-7、RBE、HCCC-9810、 GBC-SD。

主要参考资料

[1] HCCC-9810说明书

[2] CN201510226911.0 一种藤梨根提取物及其在制备治疗胆管癌药物中的应用

[3] CN201811307835.6 一种用于制备干式肿瘤细胞质控品的细胞冷冻液及其应用